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- Clontech
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- 2026年07月11日
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- 保存条件：
低温
- 英文名：
Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海善然生物科技有限公司
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| p24 ELISA法测定慢病毒滴度 | |||||
| · ELISA法快速简便测定病毒滴度 · 收集上清、裂解、结合、洗涤、测定 · p24衣壳蛋白质含量关联病毒滴度 |
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| ■ Lenti-X p24 Rapid Titer Kit通过ELISA法检测p24蛋白质快速测定慢病毒滴度。 | |||||
| 目前用于研究的重组慢病毒均包含主要的结构蛋白质，包括包膜蛋白质、基质蛋白质、病毒核心蛋白质。Gag基因编码病毒衣壳蛋白质（p24）、核衣壳蛋白质（p6和p7）和基质蛋白质（p17）。Clontech Lenti-X p24 Rapid Titer Kit特异性检测p24衣壳蛋白质，p24蛋白质含量与病毒滴度相关联。 | |||||
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| Lenti-X p24 Rapid Titer Kit的操作流程是首先裂解培养基上清液中的慢病毒粒子释放p24蛋白质，然后将裂解样品添加至预包被鼠源p24抗体的检测平板中，洗涤移除未结合的裂解液，采用生物素标记的二抗、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素及显色剂检测特异结合的p24蛋白质。本试剂盒包含p24对照用于制定标准曲线。 | |||||
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文献和实验载体，可以通过梯度稀释侵染HeLa或者293，NIH3T3细胞来确定其滴度;不含报告基因的可通过测定病毒颗粒中相关病毒蛋白的活性或者含量来确定其滴度，比如使用p24gag的ELISA试剂盒。一般来说，每4-60 x 103个病毒载体含1ng p24gag。然而这种方法测出来的滴度并不准确，不同的病毒载体类型，不同的储存方式，都会导致p24gag和病毒载体颗粒的比值变化较大。甚至是不同的实验室测出来的都会有差异。亦可使用PCR法测定滴度，其引物设计针对病毒颗粒的通用cDNA区域，因此不受外源插入片段的影响，也不需
为什么你的慢病毒总是不出毒？｜从载体设计到包装全流程拆解失败诱因
在不少科研人员眼中，慢病毒属于工艺成熟的常规工具：按配比混好质粒、转染293T细胞，48 h收集细胞上清，就能收获高滴度病毒。但在实际操作中，病毒不出毒却是高频难题，例如部分批次病毒感染靶细胞效率不足10%，荧光信号微弱难以检出，还有大量样本实测滴度远达不到实验标准。那么，慢病毒为什么会“不出毒”？ 事实上，病毒包装失败往往并非单一因素造成，而是载体设计、包装体系、细胞状态以及操作流程等多个环节共同影响的结果。 病毒包装失败，首先要明确什么叫“不出毒”
自己测滴度吗? 答：我们是在HT1080细胞株中对纯化的慢病毒进行滴度测定的。常用有4种方法进行慢病毒滴度测定，分别是： (1)通过ELISA对病毒颗粒中的p24蛋白进行检测; (2)通过定量PCR对病毒颗粒的RNA进行检查; (3)通过定量PCR对整合到基因组DNA中的病毒序列进行检测; (4)通过FACS对荧光蛋白的表达水平进行检测。 我们用基因组DNA定量PCR的方法进行慢病毒滴度的检测。前两种方法并不能区分病毒颗粒是否有活性
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