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- 2026年07月11日
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低温
- 英文名：
Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海善然生物科技有限公司
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| p24 ELISA法测定慢病毒滴度 | |||||
| · ELISA法快速简便测定病毒滴度 · 收集上清、裂解、结合、洗涤、测定 · p24衣壳蛋白质含量关联病毒滴度 |
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| ■ Lenti-X p24 Rapid Titer Kit通过ELISA法检测p24蛋白质快速测定慢病毒滴度。 | |||||
| 目前用于研究的重组慢病毒均包含主要的结构蛋白质，包括包膜蛋白质、基质蛋白质、病毒核心蛋白质。Gag基因编码病毒衣壳蛋白质（p24）、核衣壳蛋白质（p6和p7）和基质蛋白质（p17）。Clontech Lenti-X p24 Rapid Titer Kit特异性检测p24衣壳蛋白质，p24蛋白质含量与病毒滴度相关联。 | |||||
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| Lenti-X p24 Rapid Titer Kit的操作流程是首先裂解培养基上清液中的慢病毒粒子释放p24蛋白质，然后将裂解样品添加至预包被鼠源p24抗体的检测平板中，洗涤移除未结合的裂解液，采用生物素标记的二抗、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素及显色剂检测特异结合的p24蛋白质。本试剂盒包含p24对照用于制定标准曲线。 | |||||
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文献和实验（如某些原代细胞）。 无标记：适合短期池化实验，但无法富集。 2. 启动子 gRNA 一般用 U6 启动子（Pol III）。要注意 U6 对连续 T 敏感（poly-T 会导致转录提前终止），这也是 gRNA 设计时的禁忌之一。 Cas9 常用 EF1α、CMV、CAG 等。CMV 在某些细胞系（尤其是小鼠细胞和一些原代细胞）中容易沉默，长期实验建议选 EF1α 或 CAG。 3. 滴度：物理滴度 ≠ 功能滴度 这是最重要的一个坑。 物理滴度：p24 ELISA 或 qPCR 测基因组拷贝
筛选。交付前完成滴度测定与无菌、支原体检测。滴度是慢病毒方案里最大的变量——滴度不足会让实验看起来像"靶点无效"，明确的质量指标可以避免这类误判和返工。 CRISPR-Pool文库产品 CRISPR-Pool KOUT 文库：全基因组敲除筛选，以慢病毒形式提供成品文库，配合低 MOI 感染、压力筛选与高通量测序完成筛选。 CRISPR-Pool SAM 文库：激活筛选文库，同样依赖慢病毒的整合能力与 MOI 控制。 文库自建的技术门槛和周期都很高，使用成品文库病毒可以把前期准备从数月压缩到数周
载体，可以通过梯度稀释侵染HeLa或者293，NIH3T3细胞来确定其滴度;不含报告基因的可通过测定病毒颗粒中相关病毒蛋白的活性或者含量来确定其滴度，比如使用p24gag的ELISA试剂盒。一般来说，每4-60 x 103个病毒载体含1ng p24gag。然而这种方法测出来的滴度并不准确，不同的病毒载体类型，不同的储存方式，都会导致p24gag和病毒载体颗粒的比值变化较大。甚至是不同的实验室测出来的都会有差异。亦可使用PCR法测定滴度，其引物设计针对病毒颗粒的通用cDNA区域，因此不受外源插入片段的影响，也不需
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