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- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温
- 英文名：
SMARTer® PCR cDNA Synthesis Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海善然生物科技有限公司
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| SMART即RNA模板5'末端的转换机制，该技术在cDNA第一链合成的过程中，巧妙且高效地将一段已知序列加入到合成的cDNA两端，不需要adaptor连接。这段已知序列的存在对于下游应用包括扩增、RACE和文库构建等很关键。通过多种技术来利用这些已知序列的同时，一步法SMART技术的简便性和高效性保证了很高的灵敏度，并生成和扩增全长cDNA。 | |||||||||
| 微量的RNA样本操作 | |||||||||
| 整个SMART流程是在一个tube中的单酶反应。仅需对珍贵的RNA样本做很少的处理，可有效降低潜在的降解风险。这个用户友好型的流程是简单直接的，无需adaptor连接、加尾、中间过程纯化等操作。 | |||||||||
| 全长cDNA富集 | |||||||||
| 由于cDNA合成容易受到模板RNA二级结构的影响，传统方法合成的cDNA，基因5'端通常未能全部存在保留。而SMART cDNA合成过程中，由于反转录提前终止而生成的缩短了的产物，无法与SMARTer oligonucleotide结合的，在PCR过程中无法被扩增。所以，使用SMART技术结合长距离PCR合成扩增的cDNA，是被富集的全长cDNA。此外，由于5' SMARTer序列和修饰的oligo dT引物不会添加到基因组DNA和核糖体RNA转录的cDNA上，所以SMART技术合成的cDNA是不含有这些污染因素的。 | |||||||||
| 高灵敏度、高效率 | |||||||||
| 与传统的方法如adaptor连接方法相比，SMART技术优势之一，就是其具有更高的效率。SMART技术高效率和高灵敏度的特点，使SMART技术尤其适用于起始材料有限的情况，如显微切割组织、激光捕获细胞、活组织切片样本等。低至1-2 ng的total RNA已足够生成高度代表性的cDNA库用于各种下游应用。 | |||||||||
| 单步操作 | |||||||||
| SMARTer 第一链cDNA合成过程中，已知通用引物序列已经添加到了cDNA两端。第一链合成后，SMARTer cDNA可以直接用于下游PCR应用。 | |||||||||
| ■ 特点 | |||||||||
| ·total RNA起始量可以低至1-2 ng ·特异性富集全长cDNA ·优化的流程以保留真实的基因表达 ·简单的操作，无需DNase处理或单独的adaptor连接步骤 |
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文献和实验一、 Riboclone M-MLV(H- ) cDNA合成技术 Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成,最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端,方法简便易行。该系统试剂
Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成，最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。该系统试剂包括：20μg 特异性引物 200μl M-MLV第一链缓冲液(5×)，配方如下: 250mmol/L Tris·Cl pH8.3(37℃时
一、实验目的 掌握植物cDNA合成的原理和方法 二、实验原理 反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子为模板，合成出一条DNA链。形成的DNA是与RNA模板互补
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