人肺腺癌 (胸水)Calu-3

中文名：人肺腺癌 (胸水)
英文名：Calu-3

细胞常规培养及传代

<1>细胞培养
①细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件。
②细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。

<2>细胞传代（以下步骤适用于10cm皿）
①细胞培养至密度达80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；
②培养皿加入2-3mL无菌PBS，轻轻晃动皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；
③加入1mL胰酶，轻轻晃动皿，使胰酶浸没到皿底所有部位，将皿盖好放入培养箱中消化；
④3min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入第一步收集的培养基混匀；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；
⑤将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。

<3>相关问题
①部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
②细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
③传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
④细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
⑤请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。
⑥使用进口或者活力较强胰酶的客户请注意，消化过度或者吹打过于剧烈会导致细胞受损，从而导致细胞不贴壁或者死亡产生碎片，进而生长缓慢。应注意不要消化过长时间，建议1分钟以内（约30-40s），终止也要彻底，至少6倍胰酶体积的完全培养基终止，终止之后离心去除胰酶后再用新的培养基重悬后传代。