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- 2025年07月13日
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贝博生物
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100T
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文献和实验活性的多肽如酶抑制剂、抗菌肽等，作为新型药物或先导药物。 利用噬菌体肽库技术筛选药物的主要依据是：任何药物都是通过受体发挥作用的，这就需要药物与受体发生特异性结合，而受体一般都是蛋白质或核酸，这种相互结合的位点就为药物筛选与设计提供丁科学依据，避免盲目性。 1．酶抑制剂 噬菌体肽库技术是寻找蛋白酶抑制性多肽的理想工具。蛋白酶的作用位点或别构效应的调节位点往往位于空间结构上的裂缝中，通过这些裂缝蛋白酶可以与其底物发生特异性结合，从而发挥酶活性。而抑制剂通常
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
片段。 3.目的片段的克隆 纯化的片段连接到克隆载体pGEM-Tvector，转化导入宿主菌E.coliDH5α，通过蓝白斑筛选，PCR扩增鉴定后测序，获得的含所需要的目的片段的质粒。 （1）pGEM®-TEasy载体系统 I.描述 pGEM®-TEasy载体系统可用于PCR产物的克隆。这种载体是通过EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM®-TEasy载体，并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率，因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为
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