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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Uracil DNA Glycosylase (UNG)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验」和「扩增区」分割开 PCR 体系配置和 PCR 扩增实验。如果不具备这样的条件,首先要避免荧光定量 PCR 实验结束之后开盖,以防扩增产物形成气溶胶对后续实验造成污染。少量意外开盖不能避免时,可以使用含有 UNG 酶(uracil-N-glycoslyase, 尿嘧啶 DNA 糖基化酶)的扩增预混液。如果在 PCR 反应中以 dUTP 代替 dTTP 参入到 PCR 产物中,形成了含有 dUTP 的扩增产物,UNG 酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键, 降解 PCR 扩增
酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR; 3、紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法; 4、g射线辐射法:1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA,2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kGy仍不影响PCR,但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。(三)尿嘧啶糖苷酶(UNG
Primer-BLAST:NCBI的引物设计和特异性检验工具
数据库覆盖NCBI所有的物种。 实例分析 用人尿嘧啶DNA糖基化酶(uracil-DNA glycosylase genes, UNG, GeneID: 7374)的两个转录 本序列作为一个例子来分析。UNG1的序列长一点(NM_003362),UNG2的序列短一点(NM_080911,注:拿这两个基因的序列ClustalW一下就可以了)。这里用UNG2的序列设计引物,选择RefSeq mRNA database,物种是Human,其它默认。结果如下图A-B
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