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-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Very Low Density Lipoprotein Receptor (VLDLR)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验- 有活性的蛋白:昆虫细胞提供较好的蛋白正确折叠和修饰系统 - 蛋白复合物:多个蛋白共表达,表达和纯化制备蛋白复合体 - 易于放大 - 时间:最快可以二个月内得到需要的蛋白 - 最优流程:细胞生长,蛋白表达和纯化工艺流程 - (可选)蛋白活性检测服务 原核表达系统 –大肠杆菌表达平台 - 物廉价美的重组蛋白表达平台 - 丰富的可溶性表达经验 - 周期快:最快3周就能得到目的蛋白 - 稳定的实验流程 2. 蛋白相互作用研究平台
质表面静电荷、表面疏水性、分子大小的差异是最广泛应用的离子交换色谱、疏水作用色谱、凝胶过滤色谱的基础。 亲和色谱利用了靶蛋白与特定配基的特异性作用力进行分离。比如:抗原-抗体,酶-底物,酶-抑制剂,植物凝集素-糖蛋白等。 二、蛋白质的来源 1) 天然蛋白: 天然产物中的目的蛋白一般含量很少而且组分极复杂,在分离过程中须采用多个步骤才能去除各种杂质,并应在整个过程中降低蛋白水解酶的活性。 2) 重组蛋白: 重组蛋白则目标蛋白的丰度较高。重组蛋白主要有三种表达定位: 细胞质:在这种情况下,必须
溶液(最常用的盐体系为硫酸铵―水溶液),对蛋白质的构象具有一定的稳定作用,所以在分离后,蛋白质可保持高的活性回收率。目前,利用HPHIC分离的蛋白质有糖蛋白、单抗、酶和基因重组蛋白质等。 HIC在近几年的研究重点: 1.新填料的合成像HPIEC一样,HPHIC的非多孔填料、灌注色谱填料和连续柱床填料相继被合成出来,这些新填料的使用大大提高了蛋白质的分离速度和分离效果。 2.蛋白质的保留机制 蛋白质在HPHIC上是如何进行保留的一直是HPHIC的一个主要研究方向。到目前
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