- ¥279
- 炎熙
- 上海
- ECL-N-100/500
- 2025年10月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避光置于4 ºC
- 保质期：
1年
- 库存：
大量
- 规格：
50mL
| 货号 | 组份 | 数量 | 价格 |
| ECL-N-100 | A 液 | 50mL | 259元 |
| B 液 | 50mL | ||
| 说明书 | 1 份 | ||
| ECL-N-500 | A 液 | 250mL | 1089元 |
| B 液 | 250mL | ||
| 说明书 | 1 份 |
储存：避光置于4 ºC保存，有效期一年。
一、产品简介：
本试剂盒是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白或核酸，灵敏度高，背景低，最低检测灵敏度可达纳克(nanogram)级，适用于检测极微量的蛋白或核酸。发光信号较稳定，便于反复曝光操作。采用4-Iodophenol作为发光增强剂，与普通 ECL 化学发光底物相比，可明显减少一抗和二抗的使用量。
二、原理：
增强型ECL化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于本产品配制的ECL工作液中，室温孵育数分钟，HRP使工作液中的鲁米诺（Luminol）氧化并发光，试剂中添加的增强剂可以使得这种发光增强一千倍。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来，可清晰显示蛋白质或核酸条带。
三、产品优点：
纳克级灵敏度——高灵敏性，能快速检测广泛的蛋白范围，最低可检测几纳克(nanogram)的蛋白。
信号较稳定——发光时间长，能进行多次曝光，30min仍可保持约60%的发光强度。
信号强——发光信号比HRP-鲁米诺检测体系强一千倍。
稳定性高——试剂盒可在4度稳定存放一年。
节约抗体——需要更少（稀释更多）的一抗和二抗，节省抗体。
四、使用方法：
1. 印迹膜制备：执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的发光底物，检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要，所有步骤均在室温下完成。
2. ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均匀并尽快使用；将膜片置混合液中，于室温下孵育约1分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片，注意不要在膜片表面形成气泡。
3.蛋白或核酸信号显现：
1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂，仅留下少量液体覆盖表面，不可让膜完全干燥；
2). 将膜片置于保鲜膜上，吸附蛋白面朝上，小心赶尽气泡；
3). 用电子装置感光，或在暗室中用X光片曝光；
4). 根据信号的强弱适当调整曝光时间，也可选择不同时间多次曝光，以达最佳效果。
五、安全性：
无特殊毒性，按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗。
六、注意事项：
1．由于不同品牌的抗体质量不同，以及抗体的保存条件和保存时间的不同，初次使用时建议对抗体用量进行优化，以取得最优效果。
2．勿将ECL化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下，否则会导致其失活；建议保存在棕色瓶中，并避免长时间暴露在阳光下，实验室光照对试剂盒影响不大；除了X光胶片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作。
3．使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜，以确保印迹膜处于湿润状态；使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。
4．使用前配制ECL工作液，体积足够覆盖膜片即可；取A液和B液时一定要用不同的枪头，互相污染可能导致缓慢失活；配制完毕建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低；弃去使用过的混合试剂。
5．印迹膜与ECL工作液孵育后约2 min时发出的光最强，然后随着时间的延长而缓慢减弱，至30min仍可保持约60%的光信号；蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间；使用过少的ECL工作液不利反应进行，为达节约目的可将膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。
6．使用生物素/亲和素体系时，避免使用脱脂奶粉作为封闭液，因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素，容易产生非特异性信号。
7. 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。
9．NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3，如必须使用，浓度不要超过0.01%。
10. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。
11．本产品仅供研究使用。
常见问题：
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 胶片反相(白色条带，黑色背景) | 体系中HRP过量 |
将HRP标记物稀释10倍以上 |
| 印迹膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 膜在暗室中发光出强烈荧光 | ||
| 发光信号持续时间短于8小时 | ||
| 信号太弱或者无信号 | 体系中HRP过量，导致底物消 耗过快 | 将HRP标记物稀释10倍以上 |
| 抗原或抗体不足 | 提高抗原或抗体浓度 | |
| 蛋白转移率低 | 优化电转条件 | |
| HRP或者底物活性太低 | **参考下面的注释 | |
| 背景过高 |
体系中HRP过量 | 将HRP稀释10倍以上 |
| 封闭不充分 | 优化封闭条件 | |
| 封闭试剂不合适 | 更换封闭液 | |
| 清洗不充分 | 延长清洗时间、次数及清洗的体积 | |
| 胶片曝光过度 | 减少曝光时间 | |
| 抗原或抗体的浓度过高 | 减少抗原或抗体的浓度 | |
| 蛋白条带为点状 |
蛋白电转失败 | 优化电转条件 |
| 膜未平衡 | 按说明书将膜平衡 | |
| 膜和胶片之间有气泡 | 曝光之前去除气泡 | |
| 出现非特异性条带 | 体系中HRP过量 | 将HRP标记物稀释10倍以上 |
| SDS引起的非特异性结合 | Western blot 过程中避免使用SDS |
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文献和实验反应迅速，在1～5s内即可完成；具有背景低、信比高的优点，其检测极限可达5×10-9mol，发光量与AE浓度呈良好的线性反应，是一类的标记物。 3．电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）反应在电极表面进行。发光底物为三联吡啶钌[Ru(bpy) 3 2+]，另一反应物为三丙胺（TPA）。在阳电极表面，以上两化学物质可同时失去电子发生氧化反应。二价的Ru(bpy) 3 2+ 被氧化成三价Ru(bpy) 3
酯（acridiniumester，AE）类类发光剂不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。反应式如下： 电化学发光原理 上式反应迅速，在1～5s内即可完成；具有背景低、信比高的优点，其检测极限可达5×10 -9 mol，发光量与AE浓度呈良好的线性反应，是一类的标记物。 3、电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）反应在电极表面进行。发光底物为三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]，另一反应物为三丙胺（TPA）。在阳
Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到
