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分子生物学技术
真核细胞DNA的制备与定量|质粒DNA的碱裂解法提取与纯化|λ噬菌体DNA提取|DNA分子的限制性 内切酶消化|DNA片段回收与纯化|目的基因的亚克隆|PCR|引物参数计算|PCR产物的克隆|DNA序列测 定|Southern 杂交|PCR-SSCP|细胞凋亡|RNA操作中的一般要求|RNA的制备|mRNA的分离与纯化|RT-PCR|Northern Blot|RPA|ddPCR|原位杂交|原核表达|蛋白SDS电泳|Western|表达蛋白的分离与纯化|表达 蛋白的生物学活性的检测|真核转染
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文献和实验Two-Step RT-PCR protocol We will provide both one-step and two-step protocols for RT -PCR . We recommend the two-step protocol for this class. In the one-step protocol, the components of RT and PCR are mixed in a single tube
SuperScript III One-Step RT-PCR System with Platinum® Taq High Fidelity
for 25 or 100 amplification reactions of 50 µl each. Note: This kit has been optimized for end-point RT-PCR. For quantitative real-time RT-PCR, use the SuperScript™ III Platinum® One-Step Quantitative RT-PCR System. 实验
码RNA?mRNA还有不翻译的RNA呢。应该说转录水平指的是RNA水平,而蛋白应该叫翻译水平?我们这里就特指编码蛋白的mRNA的量的检测吧!方法:很多很多,我们常用的也就是RT-PCR和northern(实际上我也只知道他们,丢人啊),但是RNA没保护分析在国外很常用,也有半定量的功能,一次性试剂盒还能以此将一个表达簇一起分析,例如NFkB的转录激活谱中的8个常见基因。至于dot blot和原位杂交之流则实属于吃力不讨好,不知所云,骗人玩玩的啦,dot blot的最大贡献是发展到了反向dot blot
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