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- 库存:
99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
25T
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验以下是我最近在分离枯否细胞时得出的一点个人经验,仅供大家交流: 1,严格的无菌原则 2,充分的麻醉效果 3,开腹前腹腔注射肝素形成全身肝素化 4,插管前先将前灌流液及IV型胶原酶预热37度 5,先分离门静脉,肝动脉及下腔V,结扎肝A,在门静脉下穿两根线 6,门静脉插管双重结扎,以防分离肝脏时硅胶管脱落 7,插管成功后,剪断下腔静脉放血,肝脏在体灌注前灌流液20ML/MIN,20MIN 8,肝脏变白后,小心将肝脏游离出腹腔,置无菌瓶皿中,改用IV
t-SNE 分析、细胞类型鉴定、细胞类型细分鉴定、差异基因表达分析、Pseudo-time 分析、Qusage 分析、细胞通讯分析 3.结果解析 (1) Miz1 缺失促进肝细胞增殖和HCC敏感性 研究者在 DEN/CCl4 诱导肝癌的小鼠模型中,通过核磁共振,HE 染色成像和相关数据统计,发现 Miz1∆hep 小鼠的肝损伤并不是晚期肿瘤诱导的结果,但肝细胞转录因子 Miz1 的缺失促进了肝细胞的增殖和细胞凋亡减少,同时,Miz1∆hep 小鼠对化学物质或炎症相关的 HCC 的敏感性增加
印迹分析 单细胞转录组测序 FACS分选验证 分析工具应用: t-SNE分析 细胞类型鉴定 细胞类型细分鉴定 差异基因表达分析 Pseudo-time分析 Qusage分析 细胞通讯分析 结果解析 1. Miz1缺失促进肝细胞增殖和HCC敏感性 研究者在DEN/CCl4诱导肝癌的小鼠模型中,通过核磁共振,HE染色成像和相关数据统计,发现Miz1∆hep小鼠的肝损伤并不是晚期肿瘤诱导的结果,但肝细胞转录因子Miz1的缺失促进了肝细胞的增殖和细胞凋亡减少,同时,Miz1∆hep小鼠对化学物质或炎症相关
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