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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
一年
- 英文名:
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
- 库存:
497
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
1ml
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销
规格:1ml
英文名:Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
编号:YT483
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本品操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
储存条件:-20℃,有效期一年。
想要了解更多关于YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销售下面的产品:
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YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销关键词:Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X),YT483
F030402 胶体金标记小鼠抗人IgG Fc抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG(FC)*GOLD
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YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销关键词:Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X),YT483
·PVDF膜活化浸润液
编号:YT065
英文名称:Soaking and Activation Buffer for PVDF Membrane
规格:250ml
本品是一种绿色环保、无毒无害的用于快速浸润和活化PVDF膜的溶液,并且浸润活化后的后续处理非常便捷。一个包装的本产品可以用于约75-100张常规尺寸PVDF膜(约6.6×8.5cm)的浸润和活化。
本产品安全无毒,不含剧毒的甲醇或其它的有毒有害试剂,只需数秒时间就可以把疏水的PVDF膜充分浸润和活化。并且浸润活化后的PVDF膜只需简单地用转膜液洗涤数秒,即可被转膜液快速平衡并用于后续的转膜等实验。
PVDF膜是western blot实验中最广泛使用的转移介质之一,由于其在蛋白质截留能力、机械强度和化学相容性上都具有优越的性能而被广泛使用。PVDF膜适用于化学发光(如ECL Star、ECL Plus、ECL等)、常规显色(如DAB、TMB)、染色、同位素等方法检测蛋白。常见的PVDF膜孔径有0.45μm和0.2μm两种,后者孔径小,对小分子蛋白有较好的拦截和吸附作用,背景可能会比前者微高。
PVDF膜是疏水性的且不带电荷,不能被常规的转膜液所浸润,所以需要在使用前进行预处理以浸润和活化。最常见的方法是使用剧毒的甲醇浸润和活化PVDF膜,使PVDF膜中微孔内的空气被低表面张力的甲醇所替代,从而易于后续水或者缓冲液进入PVDF膜中的微孔内,使PVDF膜从疏水性变成亲水性,此时白色的PVDF膜会变成半透明状。通常情况,浸润活化后的PVDF膜还需要在转膜液中适当平衡2-3次,以充分去除膜上的甲醇并确保转膜时的均一性,才能用于后续的转膜等实验。
我公司的PVDF膜浸润活化液采用了优化的特殊配方,含有能产生特殊表面张力的无毒去垢剂,在确保安全无毒情况下,又能实现PVDF膜的快速浸润和活化,并且后续也极易被转膜液所平衡,是PVDF膜浸润活化的理想选择。
注意事项:
1. 本产品含有挥发性成分,使用完毕后请盖紧瓶盖,以防失效。
2. PVDF膜应使用镊子轻轻夹住边角,以免划痕损坏PVDF膜。
3. PVDF膜一经浸润和活化,需保持湿润,可放置于western转膜液或洗涤液中。如不慎被干燥,则需要重新浸润和活化。
储存条件:4℃,有效期一年。
我公司生产供应销售的克隆与表达正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购YT483型DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)优惠促销。
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文献和实验的能力,如果结合了那才是真正的参与转录的转炉银子, 有的入核后却不能和DNA结合,只能等着被降解! 其实总体而言大家做试验时都希望成功,但是EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节! 我觉的EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功
DNA聚合酶(hot start),这样可减少聚合酶在低温下仍有活性从而延伸非特异性配对的引物与模板复合物所造成的错误。变性不完全,往往使PCR 失败,因为未变性完全的DNA 双链会很快复性,减少DNA 产量。一般变性温度与时间为94℃ 1min.在变性温度下,双链DNA 解链只需几秒钟即可完全,所耗时间主要是为使反应体系完全达到适当的温度。对于富含GC 的序列,可适当提高变性温度。但变性温度过高或时间过长都会导致酶活性的损失。 二、退火:这是PCR 的一个关键参数。在理想状态下,退火温度足够
.6)。 ( 4 ) 10% 过硫酸铵(APS) 水溶液。 ( 5 ) 四甲基二乙胺(TEMED)。 ( 6 ) 去离子甲酰胺。 ( 7 ) 固定分子质量大小的寡核苷酸,作为分子质量标准或短距离 DNA 标尺,如 100 个碱基梯度标尺(NEB 公司)。 ( 8 ) 6X 溴酚蓝上样缓冲液:70% (m/V) 的蔗糖溶液中加 0.25% (m/V) 的溴酚蓝。 ( 9 ) 溴化乙锭溶液:5 mg/ml EB 水溶液。 2.5 片段纯化 2.5.1 哌啶切割后的直接纯化
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