大鼠GFAP酶联免疫检测试剂盒

大鼠GFAP酶联免疫检测试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠GFAP抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的大鼠GFAP与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠GFAP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠GFAP抗体与结合在包被抗体上的大鼠GFAP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，大鼠GFAP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠GFAP的浓度。

英文名称	Rat GFAP (Glial Fibrillary Acidic Protein) ELISA Kit
中文名称	大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)酶联免疫吸附测定试剂盒
货号	H-EL-GFAP	种属	Rat/大鼠
规格	96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法	双抗体夹心法
检测范围	0.313~20ng/mL	灵敏度	0.188ng/mL

检测时的问题：
1.为什么标准品的OD值会是上图的结果？真的是想不出来为什么会这样呀？
答：你的标准品除了标4中有一孔偏低至0.622外，其余几乎无任何线性，实际上我怀疑你的标40.622这孔做的有问题，真实的结果应该是全部标准曲线OD值都应该在1.5—2.0左右波动，试剂盒的标曲可看出有明显的线性关系：
2.大鼠GFAP酶联免疫检测试剂盒虽然待测样品3个复孔间差异不是很大，但我们也可以看到所有的待测样品OD值差异也不是很大，其中样9和样10为正常人尿标本，其值也很大，所以，想请问一下，这种现象正常吗？
答：血管紧张素原正常人和病人之间是否有差异，完全取决于血管紧张素原这个指标与某种疾病之间特异性、敏感性怎么样，如果大量的文献显示正常组与患病组间存在显著差异，那我认为你这个结果不正常。我之前提示过你：“在看定量的试剂盒至少要有一个0点吧毕竟它代表了试剂盒包被抗体和酶标抗体的交叉反应情况（也就是试剂盒的背景），样本定值时至少要减去0点在定量吧，可使你的试剂盒只有一个空白孔（不加酶标试剂）只能算作显色液的背景”如果你上图结果中的空白孔还是不加酶标试剂的话，我怀疑你的试剂盒酶标试剂和板有交叉反应，你所有的样本OD值可能都是你试剂盒交叉反应的结果，你可以用纯化水或试剂盒中的样稀（里面肯定不含有血管紧张素原）当做样本进行加样，洗板后加酶，最终看看OD值是多少！
3.大鼠GFAP酶联免疫检测试剂盒加入终止液后，有的孔的颜色没有立即由蓝色变为黄色（比如前边的标准孔，但随着加后边的样，前边的孔就会完全变成黄色。），所以，后边的孔加了终止液之后，如果没有完全变为黄色，此时，我应该立即测OD值呢？还是应该等全都变黄色之后再测呢？
答：颜色没有立即变蓝的原因可能是终止液的酸度不是太强，这个跟试剂盒有关系，你不用管，必须等到全部变成黄色才能读值，因为OD450nm，就是对黄色有最大吸收。
4.大鼠GFAP酶联免疫检测试剂盒由上图可以看到，虽然都在规定的时间内测得OD值，同一孔的数值也发生生了变化，有的孔变大了，有的孔变小了，这是什么原因造成的呢？我该以哪一次的数值为准呢？
答：多样本的OD值第一次测定高、第二次低、第三次又再次高上去说明你的酶标仪这个仪器本身的变异有点大，其实以那一次的结果都可以，因为如果是合格的试剂盒，即使OD值有所变化，但是不同组间的差异一定还是能看出来的。