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深圳市科润达
科研
酶联免疫法
可用于人血清或血浆(柠檬酸)中抗克氏锥虫IgG抗体的定性检测
人
血清或血浆(柠檬酸)
克氏锥虫包被孔(IgG):12*8可拆包被板,微孔中包被了克氏锥虫抗原,真空密封于可重新密封的铝膜金属袋中。
IgG样品稀释液:1瓶,100ml,可用于样品稀释,pH7.2±0.2,黄色,即用,白盖。
终止液:1瓶,15ml硫酸,0.2mol/l,即用,红盖。
洗涤液,20倍浓缩,1瓶,50ml 20倍浓缩的缓冲液,pH 7.2±0.2,白盖。
克氏锥虫蛋白A酶联物:1瓶,20ml过氧化酶蛋白A,蓝色,即用,黑盖。
TMB底物溶液:1瓶,15ml TMB溶液,即用,黄盖。
克氏锥虫阳性质控:1瓶,2ml,黄色,即用,红盖。
克氏锥虫临界质控:1瓶,3ml,黄色,即用,绿盖。
克氏锥虫阴性质控:1瓶,2ml,黄色,即用,蓝色。 【样品要求】 实验中将用到血清或血浆(柠檬酸),如果样品在采集后5天内检测,可将样品储存于2-8℃的环境下,如果要储存更长时间的话,则样品必须储存于-20到-70℃。如果样品冻存了,则使用前必须将样品先融解,避免反复冻融。 样品稀释: 实验开始前,将所有的样品用样品稀释液按1:100的比例稀释。将10ul样品和1ml IgG样品稀释液加入相应的试管中,旋涡混匀。阳性质控和阴性质控都是即用型的,不必稀释。 【检测方法】 实验开始之前仔细阅读操作步骤,严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行,为了避免洗板的影响,建议在洗板步骤时,洗板3次改成洗板5次,洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前,应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品,取适当数量的板条置于板架上。 请至少做以下几个孔: 1孔(例A1)做空白对照孔 1孔(例B1)做阴性质控 2孔(例C1+D1)做临界质控 1孔(例E1)做阳性质控 如果有必要的话,我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作,并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37±1℃ 1)将质控品和稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中,留下A1做空白对照孔。 2)盖板。 3)37±1℃下温育1h±5min 4)温育后,移去粘性金属板,弃取孔内反应液,用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。最后在吸水纸上拍干。 注意:洗板步骤很重要,洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。 5)除空白孔外,在每一微孔中都加入100µl克氏锥虫蛋白A酶标物 6)室温下温育30min,避免太阳直射 7)重复步骤4 8)在每一微孔中加入100µlTMB底物液 9)室温下避光温育15min 10)按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。 温育之后,包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色 注意:高阳性的病人样品会引起染色剂沉淀。这些沉淀物会影响OD值的读取。例如:我们建议按1:1的比例用生理盐水预先稀释样品。然后按1:100的比例用稀释液稀释样品,并将结果乘以2。 11)加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。
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