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文献和实验LAMP引物设计的在线网站(http://primerexplorer.jp/e/),只要导入靶基因就能自动生成成组引物。 以某一微生物的鞭毛基因为例讲解一下LAMP相物设计的过程: 首先单击浏览钮择靶基因序列文件,靶序列默认的是小于2 2 kbp。支持三个类型的文件,普通文本格式(仅含序列), FASTA格式和GenBank 格式文件。 第二,从下面个项中择定参数设定(引物设计条件条件。基于GC含量的自动判断, 起始的参数是特定的:如果GC含量小于或等于45%.,则选取AT丰度高的区
1.LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域,基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer):上游内部引物,由F2区和F1C区域组成,F2区与靶基因3’端的F2c区域互补,F1C区与靶基因5' 端的Flc区域序列相同。F3引物:上游外部引物(Forward Outer Primer),由F3区组成,并与靶基因的F3c区域互补。BIP引物:下游内部引物
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用,其灵敏度高、特异性好,是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂,对仪器和人员要求比较高,不适合基层或现场快速诊断,因此在国内的推广速度并不是很快。 2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术,即LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”,受到了世卫
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