线粒体呼吸链复合物IV试剂盒（正铁细胞色素C氧化还原酶）

检测指标：线粒体呼吸链复合物IV
线粒体呼吸链复合物IV（细胞色素C－氧化还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过细胞色素C氧化酶反应系统中还原性细胞色素C 氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、酵母等）呼吸链复合物IV 的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。


线粒体呼吸链复合物IV （Mitochondria Complex IV），又称为细胞色素C 氧化还原酶（cytochrome coxidoreductase）或细胞色素C 氧化酶（Cytochrome c oxidase），存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。呼吸链复合物IV 是由13 种不同的亚体构成的复合物，其中含有2 个血红素（heme）基团（a 和a3）和2 个铜原子，作为辅基（prosthetic groups）。呼吸链复合物IV 的遗传变异导致氧化磷酸化类疾病，包括阿茨罕默综合症和肿瘤等。基于底物还原型细胞色素C（reduced cytochrome c），受到呼吸链复合物IV 的催化，转化为氧化型细胞色素C（oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm 波长），由此定量测定呼吸链复合物IV 的活性。

试剂盒组份：
缓冲液（Reagent A） 20 毫升
反应液（Reagent B） 1 毫升
稀释液（Reagent C） 1 毫升
稳定液A（Reagent D1） 1 管
稳定液B（Reagent D2） 500 微升

保存方式
缓冲液（Reagent A）和稀释液（Reagent C）保存在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（ReagentB）避免光照；有效保证6月。

注意事项
1． 本产品为20 次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 线粒体样品中忌用DTT 和巯基乙醇等处理
4． 线粒体样品检测前，须溶解；建议冻存融解（－70℃至37℃）循环3 次
5． 如果增强酶活检测，建议使用线粒体复合物待测样品预处理试剂盒－S10342
6． 每增加1 个样品，增加反应工作液为：反应液（Reagent B）50 微升＋稳定工作液1.5 微升，以此类推。配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量
7． 系统操作过程中，背景测定只需1 次
8． 分光光度计波长严格设置在550nm，误差10nm 将不产生信号
9． 加样后3 秒内进行比色测定
10．比色测定后，比色皿须清洗彻底
11．背景空对照0 秒读数通常0.2 至0.8 为理想状态
12．背景空对照的正常读数差值（0 秒－60 秒）通常为0.001至0.005（正负即可）
13．样品0 秒读数通常和背景空对照0 秒读数一致
14．样本测定60 秒读数低于0 秒读数表明具有酶活性
15．线粒体呼吸链复合物IV 酶活性单位浓度定义：在25℃室温下，pH 7.0 的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化1 微摩尔的细胞色素C
16．建议待测样本为线粒体裂解悬液，则蛋白浓度为2 微克/100 微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量（本公司提供线粒体溶解试剂盒为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒）
17．如果使用细胞或组织裂解悬液，则蛋白浓度为50 微克/100微升