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- 2025年07月14日
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文献和实验分别为0.3%双氧水和0.3%Triton X-100混合而成。配制方法是先用微波加热的36 ml PBS，再接着加120 ul Triton X-100，并加热一会儿，冷却至临用前加0.4 ml 30%H2O2。4、5%羊血清或封闭血清，用PBS稀释。5、含0.03%H2O2的0.05%DAB（避光）：用20×DAB（1%，10 mg/ml）5 ul+0.1 ul 30% H2O2+95 ul PBS。6、一抗用PBS稀释（也可用抗体稀释液），二抗用中杉金桥的SP染色试剂盒。7、Xylene、梯度
免疫组化技术已经渗透到医学研究的各个领域，它在蛋白抗原的细胞准确定位上是其它蛋白检测方法无与伦比的。然而，要做好一张漂亮的染色切片，也不是十分容易的事。 我做免疫组化方面的实验多年，积累了很多经典案例。下面我把这些案例列举出来，并附上我们发现的问题以及如何解决这些问题的解决方法，以供大家实验参考和实验交流。 实验背景 以前做免疫组化，我一直用中杉金桥的 SP 三步法染色试剂盒，效果不错。在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验。第一批组化实验结果很好
的是Lorch的Gomori法。本实验使用的是同时采用偶氮染色法和偶联反应法的TRAP/ALP染色试剂盒（和光纯药，产品编号294-67001）。关于切片的厚度，Lorch建议为8μm，同时也研究过普通的4μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。染色法的结果是偶氮染色法中，切片过厚就会有酶扩散现象，即骨基质的TRAP染色倾向染成红色。即使是4μm的切片，只要增强了反应条件（反应温度及反应时间），也能充分染色。也就是说，TRAP染色反应
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