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- BB-3135
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
一年
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博生物
- 规格：
50T/100 T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥1000.0 |
贝博® BBproExtra® 单核细胞蛋白提取试剂盒适用于各种全血样本中单核细胞提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
1. 提取液制备：
按需要提取的样品数量，每400 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取1.5 ml新鲜抗凝血，静置吸去上层血浆。
3. 加入1 ml细胞提取液A，轻轻吹打混匀，冰上静置5分钟。过程中适当偶尔轻微摇动混合均匀。
4. 在4℃，400-500×g离心5分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
5. 在细胞沉淀中加入1 ml细胞提取液A，轻轻吹打混匀。
6. 冰上静置5分钟，过程中适当偶尔轻微摇动混合均匀。
7. 在4℃，400-500×g离心5分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
8. 在细胞沉淀中加入400 μl细胞提取液B，轻轻吹打混匀。
9. 在4℃，1000×g离心5分钟，弃上清，收集底部细胞沉淀。
10. 在细胞沉淀中加入100-200 μl冷的蛋白提取液C，充分混匀。
11. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
12. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到单核细胞总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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文献和实验1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.细胞裂解速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
3.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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