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真菌蛋白提取试剂盒-大型真菌

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  • 2025年07月15日
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      一年

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      大量

    • 供应商

      贝博生物

    • 规格

      50T/100 T

    规格:50T产品价格:¥600.0
    规格:100 T产品价格:¥1000.0

    贝博® BBproExtra® 真菌蛋白提取试剂盒适用于从各种大型真菌(蕈菌)类样本中提取总蛋白。试剂盒组分针对厚细胞壁样本进行优化,提取过程简单方便,可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。

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    1. 提取液制备:
    每500 μl冷的提取液A中加入5 μl提取液B和2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
    2. 取100-200 mg真菌组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,将样本进行液氮研磨。
    3. 研磨后加入500 μl提取液A充分混匀。
    4. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
    5. 在4℃,12000×g条件下离心10分钟。
    6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌总蛋白。
    7. 上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

     

    1.蛋白浓度低?
    处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
    试剂A用量可以根据情况进行调整,样本较小时减少试剂A每次用量。

    2.用什么方法定量蛋白?
    建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。

    3.提取时出现胶状沉淀?
    蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。

    4.提取的蛋白具有活性吗?
    本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。

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