总蛋白提取试剂盒 BB-3101
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总蛋白提取试剂盒 BB-3101

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  • BB-3101-100T
  • 2025年07月16日
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    • 保存条件

      2-8℃ 保存

    • 保质期

      一年

    • 英文名

      Total Protein Extraction Kit

    • 库存

      大量

    • 供应商

      贝博生物

    • 规格

      50T/100 T

    规格:50T产品价格:¥600.0
    规格:100 T产品价格:¥1000.0

    产品介绍:

    贝博总蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

     产品特点:
    1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
    2.提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
    3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
    4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
    5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
    6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。


    使用注意事项:

    1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
    2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
    3.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
    4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
    5.如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

    细胞样本总蛋白提取:
    悬浮细胞蛋白提取:
    1.提取液准备:      每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用
    2.取5×106个细胞,在4℃,2500×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
    3.用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
    4.每5×106 -1×107个细胞(大约50 mg细胞/50 μl细胞沉淀体积)中加入500 μl冷的总蛋白提取液,吹打混匀后,4℃条件下振荡20-30分钟,至细胞充分裂解,无明显细胞沉淀。
    5.在4℃12000×g条件下离心15分钟。
    6.将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
    7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

    组织样本总蛋白提取:
    1.
    提取液准备:
    500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用
    2.
    50-100 mg组织样本,用PBS洗干净,然后用手术剪刀尽可能剪碎,加入500 μl总蛋白提取液,用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
    3.
    将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在4℃条件下振荡10-20分钟。
    4.
    4℃10000-14000×g条件下离心15分钟。
    5.
    将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到总蛋白。
    6.
    将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。


     
    常见问题分析:
    1.蛋白浓度低?
        处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸
        头吹打混匀。

     
    2. 细胞裂解速度慢?
        为了充分保证提取得到的蛋白的活性,提取液采用独特的保护蛋白的配方,裂解能力温和,下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
     
    3. 用什么方法定量蛋白?
         建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以
         用Bradford法定量。


     

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    • 作者
    • 内容
    • 询问日期
    图标文献和实验
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    Bing Li, et al.       
    SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
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