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分析流程
非靶向代谢组学的一般分析流程为
- 代谢谱分析(也称为差异表达分析):在一组实验和对照样品中,寻找丰度改变有统计学意义的感兴趣代谢物;
- 鉴定:进行代谢谱分析后,测定这些代谢物的化学结构;
- 解释:研究流程的最后一步,解释所发现的代谢物与生物过程或生物状态之间的关联。
样品要求
血清:
1、样品量要求:
NMR: 500µl/例 (不得低于200µl/例);GC-MS or LC-MS: 200µl/例;
一定避免反复冻融。
2、收集步骤:血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后3000rpm离心5分钟,取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.2 or 0.5ml,立即-80度冻存,直到干冰寄送。
3、注意事项:
(1)取血时如用酒精消毒,请擦干擦拭部位,待酒精完全挥发后再取样。
(2)取血时如用麻醉剂,建议用异氟醚 ,防止在NMR血清谱图中出现干扰峰。
(3)如要采用血浆,请务必使用肝素钠抗凝管。
尿液:
1、样品量要求:1ml/例,原则上可以多取一点。
2、收集步骤:尿液直接分装到离心管中,每管1ml,添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠,-80度冻存寄送。
瘤胃液:
1、样品量要求:1ml/例,原则上可以多取一点。
2、收集步骤:瘤胃液经 6000×g 离心15min,取上清,分装, -80℃冷冻保存,干冰寄送。
为了让样品能保存更长的时间,取样之后可添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠溶液。
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文献和实验Theranostics | 空间代谢组学方法评估抗癌药物肿瘤靶向效率和瘤内分布异质性
癌症治疗研究中的关键问题是可区分正常组织和肿瘤组织的靶向抗肿瘤药物开发在新药研发的早期,如何快速评估抗癌药物的肿瘤靶向性非常重要,且了解药物在肿瘤内的异质性分布更具挑战。开发一种高精度、高灵敏度的定量成像分析方法有望解决这一难题。开发一种高精度、高灵敏度的定量成像分析方法有望解决这一难题。质谱成像是一种无需标记的分子成像技术,它可提供有关生物体内药物和代谢物分布的时空信息,其在药物开发领域的应用正在迅速增加。 中国医学科学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室贺玖明团队
。 与核磁共振等技术相比,色谱/质谱联用技术具有灵敏度高、选择性好、动态范围宽、信息丰富等优点,已成为代谢组学研究的主流技术平台。具体应用而言,对于非靶向分析:色谱与高分辨质谱的联用必不可少;而对于靶向分析:基于多反应监测模式的三重四极杆质谱被认为是质谱定量的 “金标准”,也是靶向分析使用较多的方法;综合了两种技术优势的拟靶向代谢组技术是代谢组研究的新方向(图 3)。 图 3 | 拟靶向代谢组学的建立【2】(Zheng F.J. et al., Nature Protocols, 2020
中药药效及药理,药物活性分子研究评价:可通过代谢组联合其他技术手段系统地印证中药治疗的合理有效,也可通过动物实验找到一些具有治疗意义的药物活性分子。 4.代谢组学技术策略及优势 代谢组学技术的最常见分支就是非靶向和靶向分析的分支,非靶向方法尽可能多地监测到所有物质。靶向分析则聚焦于已知的组分数量上的变化,例如在胁迫和疾病的反应过程中,一些生物标志物的含量变化。近些年来,拟靶向代谢组技术发展迅猛,结合非靶向的高通量以及靶向分析的经典定量技术,拟靶向技术也逐渐成为代谢组学分析中不可或缺的组成
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