山羊抗人IgG（H&L）二抗，HRP标记

Western 实验步骤

静置约 1 h，直至凝胶溶液完全聚合凝固，小心拔出梳子，准备上样。 上样 向电泳槽中加入电泳缓冲液，要求两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧，根据测得浓度计算的样本上样量点样（已处理好的样品，蛋白预染 Marker），保证每孔总蛋白量在 30-50 μg，确保总上样量体系小于 30 μL，注意上样时间尽量短，避免样品扩散。 电泳 上样后，盖好电泳槽的盖子，注意正负极，并选择适当的电压进行电泳。通常在不连续的系统中，上层浓缩胶的电泳电压(建议

培养细胞的免疫酶标抗体染色法

)1小时；     2)2％H2O2／甲醇处理(可省略)，室温20分钟，封闭内源性过氧化物酶活性；     3)PBS漂洗后1％BSA室温孵育15分钟；     4)特异性抗体(第一抗体)室温孵育3小时或4℃孵育过夜；     5)PBS充分漂洗后，HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟，如系生物素标记的第二抗体 ，反应后则需进一步按ABC试剂盒要求操作；     6)PBS漂洗后，1％戊二醛0．1m01／LPB配制固定30―60分钟，PBS漂洗；     7)呈色反应：0．

一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

一抗和二抗与非特异性位点结合。通透后用PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加山羊血清，室温封闭30min。常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或者是羊血清。从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。醛类固定的样品，在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封闭液进行封闭。 4. 一抗孵育 根据一抗说明书，按照适当比例用一抗稀释液稀释一抗，用吸水纸吸尽封闭液，每张玻片滴加稀释好的一抗并放入湿盒， 4℃孵育过夜。回收一抗，加入