ATG16抗体（中间区域）

粘附分子的表达的调节

的LFA-1分子 NKI-L16是一种抗LFA-1的单克隆抗体，其识别的表位在静止淋巴细胞暴露的水平很低。当NKI-L16McAb与淋巴细胞表面的LFA-1作用后，不仅不阻断LFA-1介导的粘附作用，反而可以诱导静止淋巴细胞的相互粘附而使细胞发生凝集。这种诱导粘附作用的机理部分是由NKI-L16McAb改变了LFA-1分子的构型，诱导了NKI-L16识别的表位在静止淋巴细胞的表达。NKI-L16识别表位的表达是粘附作用发生的重要条件，但并不是唯一的，因为CTL细胞虽表达高水平的NKI-L16表位却并不

原核表达--表达前的分析比什么都重要

ATG后不是紧跟外源片段的，如果中间含有载体序列，务必确定中间这段序列不会造成你外源序列的移码。按情况需要，可以加1到2个碱基在引物中使读码框正确。有始有终，同样正常的终止密码子才能保证蛋白的产出。大部分载体也有终止密码子，如果你对载体的不放心，也可以在引物中设计上终止密码子，这样万无一失。 4.还有就是设计一对引物需要注意的地方：一对引物之间Tm值相差不宜过大，能一样最好；一对引物不宜形成发夹结构、互相配对，若配对时最好不要是G-C的结合（可以用软件分析）；3'端以G、C结尾为宜等等。如果要详细

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

。 Target 设计 Target 设计：通常情况下我们仅需要在你的目的位置附近找到 NGG（N 代表任意核苷酸），然后找到其紧邻的上游 20 nt 即可（如上图）。 目的位置的选择：我们绝大部分时候的目的是完全 KO 一个基因，其原理是利用移码突变（CRISPR/Cas 系统诱导产生 indel）。所以我们一般选择距离起始密码子 ATG 下游 200bp 范围内的 exon 区域。另外，通常一个基因往往会转录成 2 个以上的 isoforms，所以请选择尽量