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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 检测范围：
来电咨询
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
科研试剂
- 样本：
来电咨询
- 规格：
96T
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的四环素类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗四环素类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含四环素类药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中四环素类药物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)
2.2 反应模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 检测下限：
组织、肝脏、鸡蛋………………0.3ppb
蜂蜜………………………………2ppb
尿样………………………………0.5ppb
2.4 交叉反应率：
四环素………………………………
二甲胺四环素………………………125%
吡四环素……………………………110%
金霉素………………………………
脱甲基金霉素………………………35%
土霉素………………………………58%
强力霉素……………………………45%
2.5 样本回收率：
组织、肝脏、鸡蛋…………85±20%
蜂蜜…………………………75±20%
尿样…………………………80±20%
3 试剂盒组成
酶标板………………………96孔
标准品（黑盖）：各1ml
0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
高标准品（黑盖）：1ppm…………1ml
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液A（白盖）……………………6ml
底物液B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
5X复溶液（黄盖）…………………50ml
说明书………………………………1份
4 四环素类检测试剂盒需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂：三氯乙酸、甲醇
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液：
配液1：1%三氯乙酸溶液
称取1g三氯乙酸加去离子水100ml溶解。
配液2：复溶液
将5×复溶液用去离子水5倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 组织、肝脏、鸡蛋样本处理方法（不用过柱）
1）用均质器均质组织、肝脏、鸡蛋样本；
2）称取2±0.05g样本于50ml离心管中，加入6ml 1%三氯乙酸溶液，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；
3）取出1ml上清液于另一试管中，加入1m甲醇，振荡1min，室温4000r/min以上，离心10min；
4）取1ml上清液在50-60℃氮气或空气吹干，加入1ml复溶液溶解残留的干燥物；
5）取50 µl用于分析。
样本稀释倍数：6 检测下限：0.3ppb
5.3.2 蜂蜜样本处理方法
1）准确称取1±0.05g蜂蜜样本于离心管中，加入2ml 1%三氯乙酸，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；
2）取出100ul上清液于另一试管中，加入1900ul复溶液稀释，混合30s；
3）取50µl用于分析。
样本稀释倍数：40 检测下限：2ppb
5.3.3 尿样本的处理方法
1）用复溶液将尿样10倍稀释（如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。
2）取50µl稀释的尿样用于分析。
样本稀释倍数：10 检测下限：0.5ppb
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
实验开始前，用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
制备四环素标准应用液：将各浓度标准品分别用稀释的复溶液10倍稀释成应用液，现配 现用。（如：分别取50ul各浓度标准品加450ul稀释的复溶液，混合均匀，即成各浓度标准品的应用液。）
6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光反应30分钟。
6.3 洗 涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，后用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6.4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，37℃避光反应30分钟。
6.5 洗 涤：同上
6.6 显 色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光显色15分钟。
6.7 终 止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以，即
百分吸光度值（%）＝
A
×
A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
8 四环素类检测试剂盒注意事项
8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。
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文献和实验一、反应曲线 首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示： 二、反应原理 对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
佚名 四环素类抗生素具有共同的基本母核（氢化骈四苯），仅取代基有所不同。它们是两性物质，可与碱或酸结合成盐，在碱性水溶液中易降解，在酸性水溶液中则较稳定，故临床一般用其盐酸盐。 四环素类可分为天然品与半合成品两类。天然品有金霉素、土霉素、四环素和去甲金霉素等。金霉素已被淘汰，去甲金霉素我国不生产。四环素和土霉素较常用。半合成品有多西环素和米诺
网络 第四十一章 四环素类及氯霉素 四环素类和氯霉素的抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体，故常称为广谱抗生素。 第一节 四环素类 四环素类抗生素具有共同的基本母核（氢化骈四苯），仅取代基有所不同。它们是两性物质，可与碱或酸结合成盐，在碱性水溶液中易降解，在酸性水溶液中则较稳定，故临床一般用其盐酸盐。
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