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- 详细信息
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- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Dual Adaptor Of Phosphotyrosine And 3-Phosphoinositides (DAPP1)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验光素标记,相同数量的样品混在一起并与同一块微阵列杂交。在每个微点上的两个不同标记分子的比直接反应靶分子的浓度是相同或不同。 直接从DNA芯片技术转变过来,Haab等对抗体-抗原微阵列采用相同的双颜色标记程序(图3)。他们采用一套110对抗原-抗体来制造免疫分析微阵列,以此作为不同蛋白分析概念的证明。固定抗体或抗原,而相应的靶分子在诸如血清的复杂溶液中用荧光标记。一个头上有抗原的样品标记成一种荧光,而包含不同浓度的抗原的另一个样品用另一种荧光标记。两种样品混合后,与同一块微阵列同时孵育。双颜色
合成寡核苷酸。从细胞中提取的靶分子,标记后与固定的互补捕获探针杂交,然后测量和定量被捕获的靶分子。DNA芯片技术利用大量的靶分子能在大量的平行测量中测定而样品消耗低的事实。另外,用单个阵列可能完成两个不同样品的比较分析。在两个样品中的靶分子用两种不同的荧光素标记,相同数量的样品混在一起并与同一块微阵列杂交。在每个微点上的两个不同标记分子的比直接反应靶分子的浓度是相同或不同。 直接从DNA芯片技术转变过来,Haab等对抗体-抗原微阵列采用相同的双颜色标记程序。他们采用一套110对抗原-抗体来制造免疫
蛋白质、多肽在高盐存在下,可以结合疏水凝胶,而在盐浓度降低时又可以解脱的原理实现分离。 d、亲和色谱 利用蛋白质、多肽与某些配基的特异性相互作用而进行分离。例如:酶-底物,酶-抑制剂,糖蛋白-凝集素,抗原-抗体等。近来发展了金属螯合亲和色谱,用于纯化表面含色氨酸、酪氨酸、组氨酸等的蛋白质以及(His)6-tagged重组蛋白。 亲和色谱分为特异性亲和色谱和组别亲和色谱两类。肝素、凝集素、染料、金属螯合亲和色谱均为组别亲和色谱(同一配基可以结合许多种蛋白质)。 e、反相色谱 常用于蛋白质、多肽
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