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- ZYP368Mi01
- 2025年11月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant ATPase, Na+/K+ Transporting Alpha 2 Polypeptide (ATP1a2)
- 库存：
大量
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学，重组蛋白，细胞因子，抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌，致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞，因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇，使免疫组化标记敏感性明显降低，因此在染色前，有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时，浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要，有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要，同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强，但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效，而对固定很长时间旧的存档组织，酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性，但经福尔马林固定的蛋白质，温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示，温度为92-98℃是合适的，95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后，取出放于室温中让其慢慢地降温，绝对不能为了争取时间，强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结，要有一个自然环境让其自然放松下来，随着温度的降低，它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体，一定要充足，防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时，由于它的量较大，可延缓液体的沸腾时间，增加切片受微波辐射的量，对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR
离子（K＋）与镁离子（Mg2 ）。在催化ATP水解时利用ATP水解所释放的能量可把Na 传送到细胞外，把K 传送到细胞内。每水解一分子ATP传送3个Na ，2个K 。在钠钾ATP酶的作用过程中ATP的末端磷酸与酶蛋白谷氨酸残基γ羧基形成中间物。 钠钾ATP酶分子量为 15万，有两种亚基，α亚基分子量为 112 200，是催化亚基，由细胞浆中游离核蛋白体合成，β亚基蛋白质部分分子量为 34 900，是糖蛋白，由粗糙内质网系合成，它们都是质膜的固有蛋白。 一般认为
。这个过程的能量是由Na+的浓度梯度（化学势能）提供的，它足以将葡萄糖从低浓度转运到高浓度。当小肠上皮细胞内的葡萄糖浓度增高到一定程度，葡萄糖经小肠上皮细胞基底面单向葡萄糖转运体（unidirectional glucose transporter）顺浓度梯度被动扩散到血液中。小肠上皮细胞内增多的Na+通过钠钾泵（Na+-K+ ATP酶），利用ATP提供的能量，从基底面被泵出小肠上皮细胞外，进入血液，从而降低小肠上皮细胞内Na+浓度，维持刷状缘两侧Na+的浓度梯度，使葡萄糖能不断地被转运。
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