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-20℃
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6-12months
- 英文名:
Recombinant Basonuclin 1 (BNC1)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验高手进行补充 pET,原核表达金标准(转) pET 载体中,目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录 和翻译信号控制之下,并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大,提供了用于表达的新技术和选择,目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。 优点 · 是原核蛋白表达 引用最多的系统 · 在任何大肠杆菌 表达系统中,基础
先来看下传统重组蛋白表达系统: 传统重组蛋白表达系统应对的挑战: 操作流程长:5天-4周时间 很多蛋白不能在细胞内成功表达 不可以改造目标蛋白 以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统,具有表达量高和成本低的优点,但是蛋白质翻译后缺乏加工机制(比如形成二硫键和蛋白糖基化等),且很难保留生物活性。 以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近真核生物等优点,但是部分蛋白产品易降解,表达量不可控。 哺乳动物细胞和昆虫
先前已经提到 Strep-tag® 的历史,现在我们将着重介绍 Strep-tag® 在哺乳类细胞表达系统的应用。虽然大肠杆菌 E.coli 表达系统经济实惠,但由于缺乏重要的脂类,分子螫合物,以及重要的翻译后修饰,用它表达真核蛋白,可能会影响蛋白本身的折叠及功能,以膜蛋白为例,大肠杆菌表达系统能影响目标蛋白在细胞膜的插入位置、及其应有的功能[1]。除此之外,当目标蛋白大于 50kDa 时,使用大肠杆菌系统可能表达出不完整的蛋白[2]。所以,为了研究特定蛋白的功能(如:信号通路)、生产较大
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