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    可溶性抗原(soluble antigen)的制备及鉴定

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    可溶性抗原(soluble antigen)的制备及鉴定

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        上海远慕生物科技有限公司

      • 服务名称:

        可溶性抗原制备及鉴定

      关键词:可溶性 抗原 可溶性抗原 糖蛋白 脂蛋白 细胞匀浆

      抗体制备详情—来电上海远慕生物科技有限公司
      电话:021-58322859   QQ:2712232205  手机:18321664727
      (以下只是较简要介绍,仅作为参考!)

      蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原,它们有相当部分来源于组织和细胞,成分复杂。制备这类免疫原时,首先须将组织和细胞破碎,然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原,提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。

      一、组织匀浆的制备

      用于制备免疫原的材料必须是新鲜或低温保存的。材料获得后立即去除包膜或结缔组织,脏器应进行灌洗,去除血管内残留的血液,用含0.5g/L NaN3的生理盐水洗去血迹及污物;在4℃水浴或冰浴中将洗净的组织剪成0.3~0.5cm3小块,加入适量生理盐水,装入捣碎机筒内制成组织匀浆。组织匀浆经3000r/min离心10min后,上清液作为提取可溶性抗原的材料。上清液在提取前还必须进行离心去除细胞碎片及微小的组织。

      二、细胞破碎

      提取细胞的可溶性抗原,需将细胞破碎。根据细胞类型不同,选择破碎的方法也有一定的差异,现介绍几种常用的细胞破碎方法。

      1、酶处理法

      溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等在一定的条件能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶对革兰阳性菌的细胞壁有溶菌作用。酶处理法适用于多种微生物细胞的溶解,该方法具有作用条件温和、内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏程度可以控制等特点。

      2、冻融法

      细胞主要因突然冷冻,细胞内冰晶的形成及胞内外溶剂浓度突然改变而破坏。其方法是将破碎的细胞置-15~-20℃冰箱内完全冻结,然后从冰箱取出,让其在30~37℃中缓慢融化。如此反复两次,大部分组织细胞及细胞内的颗粒可被破。此法适用于组织细胞,对微生物的细胞作用较差。

      3、超声破碎法

      这是利用超声波的机械振动而使细胞破碎的一种方法。由于超声波发生时的空腔作用(cavitation),使液体局部减压,引发液体内部流动,在漩涡生成与消失时,产生很大的压力而使细胞破碎。超声波所使用的频率从1~20kHz不等。进行超声破碎时,需间歇进行,避免长时间超声产热,导致抗原破坏。也可将超声粉碎的细胞置于冰浴降温。超声破碎细胞,方法简单,重复性较好,且节省时间。微生物和组织细胞的破碎,均可采用此方法。

      4、表面活性剂处理法

      在适当的温度、pH及低离子强度的条件下,表面活性剂能与脂蛋白形成微泡,通过细胞膜的通透性改变使细胞溶解。常用的表面活性剂有十二烷基磺酸钠(SDS阳离子型),新洁尔灭,Triton X-100等。如将大肠杆菌湿菌体1g,加入2%浓度的Triton X-100作用60min,可使绝大多数大肠杆菌的菌体裂解。此方法作用比较温和。在提取核酸时,常用此法破碎细胞。

      三、蛋白质的提纯

      蛋白质纯化方法属于生物化学技术,本章只作较简要介绍。

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