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- 上海莼试
- CS-002-1852
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- 2025年07月15日
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33
- 供应商：
上海莼试
- 肿瘤类型：
详见说明书
- 细胞类型：
未定
- ATCC Number：
详见说明书
- 品系：
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- 组织来源：
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- 相关疾病：
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- 物种来源：
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- 免疫类型：
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- 细胞形态：
淋巴母细胞样
- 是否是肿瘤细胞：
详见说明书
- 器官来源：
小鼠杂交瘤细胞株
- 运输方式：
干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
- 年限：
详见说明书
- 生长状态：
悬浮生长
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞株；3D-3A12-IgG
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞属专利保藏，其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts)10%FBS
传代方法 1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
小鼠杂交瘤细胞株；3D-3A12-IgG操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
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文献和实验位点） VH5’IgG-GGGGCGGCCGC GTTTTGGCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA VH3’IgM-GGGGCGGCCGC TGACTCTCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA 4)小鼠VL3’端引物（引入NotⅠ酶切位点） VL5’-GCGGCGGCCGC AGCCCGTTT[G/T]ATTTCCA[A/G]CTT (2)从杂交瘤细胞提取RNA，反转录成cDNA,均按试剂盒说明书操作。
隆抗体亚类的鉴定：将单抗培养上清液浓缩，与抗鼠IgG亚类血清作双扩散试验。 1.6 免疫转印：APT经SDS-PAGE分离，在电转移系统中将凝胶蛋白转移至硝酸纤维素膜上，分别与各株单抗反应，浸入辣根过氧化物酶标记的IgG，最终以联苯二胺系统显色［见：顾方舟主编.淋巴细胞杂交瘤技术的应用.北京：人民卫生出版社，1985：23-25］。 2 结果 2.1 杂交瘤细胞株的建立：含阳性血清小鼠的脾脏细胞与NS-1细胞融合，悬于HAT选择性培养基中接种于24孔和96孔板，5 d左右见
隆 抗体的制备和冻存 筛选出的阳性细胞 株应及早进行抗体制备，因为融合细胞 随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞 死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞 在体外培养，在培养液中分离单克隆 抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆 抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞 接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收
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