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Safe Harbor基因敲入
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人类AAVS1 safe harbor基因敲入试剂盒 人类第19号染色体上的 AAVS1(又名为 PPP1R2C 位点)是一个经过验证、能确保转入DNA片段预期功能的“安全港”位点。该位点是一个开放的染色质结构,可以保证转入基因能被正常转录。另外很重要的一点是在该位点插入外源基因片段对细胞无已知的副作用。靶向 AAVS1 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能特异剪切人类第19号染色体上的 AAVS1 位点,生成DNA双链断裂(DSB),触发DNA的自然修复机制,诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组(HR),将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。
ROSA26 位点(又称为 ROSAβgeo26 位点)位于小鼠基因组第6号染色体,最早是在一支名为ROSAβgeo26 的小鼠品系中被发现的。该品系的小鼠因为一个随机插入的基因,在所有组织中都能检测到高水平的β半乳糖苷酶表达。该位点表达一个编码转录本和两个非编码的转录本,只有非编码转录本的序列受到这个外源插入的干扰。虽然两个等位区都带有外源插入片段的纯合子小鼠幼崽出生率略低于杂合子幼崽,但纯合子幼崽也能正常发育并繁殖。自此,“ROSA26”位点就被用于基因转入;这个位点的基因敲入对细胞及小鼠的健康无副作用,并能保证转入基因的正常稳定表达。特异靶向 ROSA26 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能在小鼠第6号染色体上的 ROSA26 位点上生成 DNA 双链断裂,触发细胞的 DNA 修复机制,诱导基因组与 ROSA26 供体克隆之间发生同源重组(HR),将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 ROSA26 safe harbor 位点。
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