荧光抗体稀释液（Kolmers法）

免疫组化经验总结

显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3. 分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏

免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：补体法

一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——补体法，是一种荧光抗体染色法。本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制，因而一种荧光抗体可作更广泛的应用，敏感性亦较间接法高，效价低的免疫血清亦可应用，节省免疫血清，尤其是对检查形态小的如立克氏体、病毒颗粒等或浓度较低的抗原物质时甚为理想。二、操作指南1、材料（1）免疫血清60℃灭活20min，用Kolmers盐水作2倍稀释成1：2，1：4，1：8……。补体用1：10稀释的新鲜豚鼠血清，抗补体荧光抗体等，按下述的补体法染色。免疫

补体法免疫荧光组织化学染色步骤

1．材料 ① 免疫 血清60℃灭活20分钟，用Kolmers盐水作2倍稀释成1:2、1:4、1:8或更高。如免疫血清补体结合的效价为1:32，则免疫血清应作1:8稀释。Kolmers盐水配制：在pH 7.4，0.1mol/L的磷酸缓冲盐水中溶解MgSO4 ，含量为0.01%； ② 补体用新鲜豚鼠血清，一般作1:10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果，按2单位的比例，用Kolmers盐水稀释备用； ③ 抗补体荧光抗体：在免疫血清效价为1:4，补体为2单位的条件下，用补体染色