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- 百奥莱博
- 北京
- YT014-GSV
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冷藏
- 保质期：
长期
- 英文名：
Proteinase K
- 库存：
469
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
1ml
酶活力大于30U/mg。在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。
在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。
蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50
-55℃。
在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。
常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。
如果需要把20mg/ml的蛋白酶K稀释成一定浓度，推荐用YT089免疫染色洗涤液或10mM Tris-HCl pH7.4-7.8进行稀释。
保存条件：-20℃保存。
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文献和实验洗脱液，接着按照3.2b进行）2a.加入2ulRNaseA(0.5mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。DNA采用PCR纯化试剂盒中厂家说明进行纯化。样品冻存于-20°C.样品之所以加入RnaseA是因为高浓度RNA会在使用PCR纯化试剂盒时干扰DNA的纯化。而纯化柱子的饱和度是既定的。2b.加入5ul蛋白酶K(20mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。采用酚/氯仿抽提的DNA使用乙醇沉淀于10ul的糖原(5mg/ml).中。100ul水重悬浮。样品
一、柠檬酸钠法 1. 把玻片放在玻璃固定架上，再将架子放在盛有600ml的10mM柠檬酸钠（pH6.0）的容器中。 2. 微波中高火6-8min。 3. 室温冷却。 4. 用PBS洗涤3次，每次5min。 二、蛋白酶K法 1. 配制新鲜溶液： 25μl 20mg/ml蛋白酶K； 2.5ml 1MTris-HCl（pH8.0）； 0.5ml 0.5M EDTA（pH8.0）； 加水定容到50ml。 2. 37℃下，将玻片放在架子上孵育5min（蛋白酶K不要预热
离心管以4000rpm离心10分钟，弃上清；加10倍体积TE洗一遍，以4000rpm离心10分钟，弃上清 ③ 加适量TE稀释 ④ 取400μl稀释液于1.5ml的Eppendorf管，缓慢加入10％SDS溶液，至终浓度0.5％ (加20μl)，摇匀直至溶液变粘稠 ⑤ 加入Rnase(200μg/ml)至终浓度20ug/ml(42μl)混匀，置37℃保温60分钟（总体积 420μl)。 ⑥ 加蛋白酶K(20mg/ml)至终浓度100ug/m1混匀(加21ul)，于50℃保温3小时
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