YBP096型Turbo Script逆转录第一链cDNA合

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北京百奥莱博专业生产销售YBP096型Turbo Script逆转录第一链cDNA合成试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

YBP096型Turbo Script逆转录第一链cDNA合成试剂盒厂家
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：YBP096
规格：25次
产品介绍：
Turbo Script逆转录第一链cDNA合成试剂盒能够从微量的poly(A)mRNA或总RNA中高效率的合成第一链cDNA，试剂盒所采的高质量Turbo RT 逆转录酶，是一种经基因工程改造得来的莫罗尼鼠白血病病毒逆转录酶(Moloney Murine Leukemia Virus，M-MLV逆转录酶)，即在野生型M-MLV逆转录酶的氨基酸序列上引进了两个突变位点，其中一个点突变(D524N)去除了核糖核酸酶H(一种专用于切割DNA与RNA杂交链上RNA分子的酶)活性，另一个点突变(Q84A)增加了该酶与模板-引物的亲和力，从而增强了逆转录酶的活性和持续合成能力。
同野生型的M-MLV 逆转录酶和缺失RNase H的 M-MLV 逆转录酶相比，Turbo RT 逆转录酶合成的第一链cDNA量更多，更长，可逆转录得到高产量的第一链cDNA。
注意事项：
• 从总RNA中分离出poly(A)RNA并不是必须的，但是如果先分离出poly(A)RNA可以提高产量和纯度。
• RNA 样品要避免基因组DNA 污染。
• 使用Oligo(dT)18引物一般不需要优化，但是使用Hexamer引物需要优化Hexamer和RNA的比例。提高Hexamer/R NA的比例可以提高较短cDNA(约500bp)产量，降低Hexamer/RNA的比例可以产出较长的片段。
• 对于G C 含量丰富或者二级结构复杂的mRNA模板可以提高反应温度到45°C来帮助逆转录反应延长。
• cDNA 产物应置于-20°C保存。
产品储存：
储存在-70°C，如经常使用，储存在-20°C。为减少对产品稳定性的影响，可尽量避免多次冻融或存于温度变化较大的地方。
YBP096型Turbo Script逆转录第一链cDNA合成试剂盒厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·EASYspin酵母RNA快速提取试剂盒
编号：YBP003
规格：50次
适用范围：
适用于从酵母中快速提取无基因组DNA污染的高纯度的酵母RNA。
本试剂盒按照指示储存12个月不影响使用效果。
储存事项：
1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
3.为避免降低活性，方便运输，提供Lyticase(2500U)为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.25ml灭菌水溶解配制成10U/μl，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存，避免反复冻融。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：
酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA选择性吸附于离心柱内玻璃纤维膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从玻璃纤维膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内玻璃纤维膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.基因组DNA清除柱可以有效的消除基因组DNA的污染。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
注意事项
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12，000 rpm的传统台式离心机。
3.需要自备乙醇，β-巯基乙醇，水浴锅。
4.裂解液RLTplus2 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.RNA 纯度及浓度检测:
完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯 度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA 不纯。
浓 度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40
6.如果破壁效果不好导致RNA产量低，可以加大lyicase用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间来提高效果，不适合Lyticase消化的酵母可选用Zymolase或者其它方法如玻璃珠涡旋，反复冻融等。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!
操作前在裂解液RLTplus2中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLTplus2 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLTplus2 4℃可放置一个月。
吸取使用量的缓冲液SE加入0.1%β-巯基乙醇，回复到室温备用。
1.小量酵母培养细胞
a.收集1ml （约107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管， 9,000 rpm离心30秒，尽可能吸弃上清。
b.加入100μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约50U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
c.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶物，最高速离心2分钟，取全部上清）
d.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入250μl 96－100％乙醇，立即吹打混匀，不要离心。
e.接操作步骤项下3。
2.中量酵母培养细胞
a.收集2－3ml （约3x107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管（超过1.5ml可分两次在同一个离心管内进行收集细胞），12,000rpm离心15秒，尽可能吸弃上清。
b.加入600μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约100-150U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
c.12,000 rpm离心1分钟，尽可能吸弃上清。
d.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶解物，最高速离心2分钟，取上清）
e.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入等体积70％乙醇（DEPC水配制，约350μl）立即吹打混匀，不要离心。
f.接操作步骤项下3。
3.将混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30-60秒，弃掉废液。
4.加700μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置5分钟再离心。
5.加入700μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，重复一遍。
6.将吸附柱RA放回空收集管中，12,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-80℃水浴中加热）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
8.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤7, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。


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·Taq Plus DNA Polymerase
编号：YBP082
规格：250U/500U/3000U
产品介绍：
Taq Plus DNA Polymerase 是Taq和Pfu DNA聚合酶的混合物，与Taq DNA聚合酶相比，具有扩增长度增加(简单模板可有效扩增长达20kb，对复杂模板也可达10kb)、保真度好等优点；与Pfu DNA聚合酶比较，具有扩增速度快，反应效率高的优势。PCR产物可直接进行T/A载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A后再进行T/A载体克隆。
产品特点：
有5"-3"外切核酸酶活性和3"-5"外切酶活性。PCR产物可直接进行TA载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A后再进行TA载体克隆。
适用范围：
常用于一些保真度高，结构复杂如GC含量丰富，有二级结构等模板的扩增。大多数情况下可替代Taq DNA Polymerase。
产品储存：
-20°C 保存。浓度：5 U/μl。

·内毒素清除剂(Endotoxin Removal Solution)
编号：YBP051
规格：200次/500次
产品介绍：
在特定pH、盐浓度和温度条件下，本产品能与样品中的内毒素特异结合，通过离心清除，一般经过3次重复抽提即可将内毒素活性降低1000-10000倍。
产品储存：
4°C 储存1个月，-20°C长期储存。
适用范围: 在特定pH、盐浓度和温度条件下，本产品 能与样品中的内毒素特异结合，通过离心清除， 一般经过3次重复抽提即可将内毒素活性降低 1000-10000倍。


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·pBS-T 载体连接试剂盒
编号：YBP149
规格：20次/60次
产品介绍：
本试剂盒中的pBS-T是高效克隆PCR产物的专用载体，是一种新颖的pUC系列T载体，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同，pBS-T通过Xcm I酶切后使其多克隆位点两侧的3"末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的重组效率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"添加一个A，可与pBS-T Vector 3"端的T互补连接，同时3"T突出端可以防止载体的自身环化，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。本试剂盒中的pBS-T载体包含有T7和T3RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活使得菌落在指示培养基中呈现不同颜色，可根据颜色直接筛选重组克隆，白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆。
产品储存：
-20°C 保存，避免反复冻融。

·DNA Marker III
编号：YBP133
规格：50次/100次/200次
产品介绍：
本产品是由6条线状双链DNA条带组成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。
本产品为即用型产品，已含有1× Loading Buffer，可根据实验需要，直接取6 μl电泳(每1mm点样孔宽度加1.5 μll，如果加样孔较宽，可适当增加上样量)使用方便，电泳图像清晰。
本产品中6条带分别为200，400，600，800，1000，1500bp，每条带浓度为50 ng/ 6 μl。
产品浓度：
0.05 mg/ml
产品储存：
4°C保存6个月内有效，-20°C保存一年有效。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销售商，恭候您的咨询选购YBP096型Turbo Script逆转录第一链cDNA合成试剂盒厂家。