手机验证
2~8℃
长期
265
北京百奥莱博科技有限公司
50T/100T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售北京现货线粒体提取试剂盒库存,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
编号:XH058
规格:50T/100T
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
二,说明
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
三,操作步骤
1. 样本处理
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次;
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心5 min;
3. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心5 min。
4.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;
5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min;
6.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
6. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事项:
1. 为保证获得完整的线粒体,第一是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。
五 储存:四周内使用可4℃储存,长期置-20℃
转速与离心力换算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
我公司的北京现货线粒体提取试剂盒库存,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
·辣根过氧化物酶(HRP)标记套装
编号:XH087
规格:一套
保存条件:HRP(辣根过氧化物酶)-20度保存,透析袋2-8度处理。其他常温保存。
产品说明:本套装是将HRP标记的常用试剂集合为一体而成。本操作流程为经碘的高碘酸氧化法。适合于蛋白等含有氨基物质的标记。特别是抗体的标记。
如果待标记物分子量太小(如小于15KD),可能会穿过透析袋而造成样品损失。
标记原理:在低PH下使RP经NaIO4氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相连,形成斯夫氏硷,后者可进一步用NaBH4还原生成稳定的酶标记物。
操作方法:
一, 标记量的计算:HRP(辣根过氧化物酶)分子量为40KD左右。一般为HRP:待标记物=2:1到4:1之间。比如抗体IgG分子量一般为150-160KD。则10mg HRP可标记抗体在10mg-20mg之间。
二, 计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作,最好是从下午开始。将HRP(辣根过氧化物酶)一共10mg加入1ml双蒸水溶解。溶解后可放-20度存放一个月。如果想作两次标记,可适当称量5mg。但并不推荐称量更小的质量。以免产生更大误差。而且透析袋一般也只够两次用量。
三, 剪切合适长度透析袋,用双蒸水清洗三次备用。透析袋分宽窄两种,适合于不同量样品的透析,请自己安排。称取21.3mg NaIO4,加入0.5ml双蒸水溶解(现配现用,浓度为0.2M),将100mM乙酸钠(PH4.4)用双蒸水稀释100倍成1mM乙酸钠(PH4.4)。准备待标记物,如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差,如生理盐水,可等二天再准备。如果不确定,将0.2M PH9.5 CB稀释20倍(请不要一次稀释完,留1-2ml左右备用),作为透析液,将待标记物装入透析袋中4℃透析过夜,透析袋适当留长约2ml体积的量以备第二天加入酶(透析袋使用请见附录)。
四, 以一次标记完为例,如果标记量小,可按比例减小试剂的用量。取0.2ml现配的NaIO4溶液加入HRP溶液中,混匀,避光常温反应两小时。装入透析袋中,在稀释过的乙酸钠(PH4.4)溶液中4℃透析过夜(透析袋使用请见附录)。
五, 第二天早上,如果样品为固体,可用水溶解,加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB,混匀。取出活化好的HRP装入一适合离心管中,加入50ul 0.2M PH9.5 CB,混匀,立刻加入待标记物中,混匀。避光常温反应两小时。
六, 加0.1ml新配的10mg/ml NaBH4液,混匀,常温半小时。
七, 配制合适的透析液,如生理盐水或者PBS等。透析酶标记物。
八, 如果有条件进一步纯化,可透析半天后去进一步纯化,如果不纯化,请在4℃透析至少24小时。勤换液。
附透析袋使用方法:
本透析袋已预处理过,用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹,但如果铁夹不够用,下部可用细线或者其他的透析袋夹。
将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住,上面支开,加入待透析物,留一定量的空气在顶上,并小心的折一折,用铁夹夹住,轻轻的挤压,如没发现有液体流出,可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹,将透析袋吊在透析液中,补充透析液,使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。
北京现货线粒体提取试剂盒库存关键词:线粒体提取试剂盒,XH058,百奥莱博
·非变性细胞裂解缓冲液
编号:XH065
规格:100ml
非变性细胞裂解缓冲液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白磷酸酶抑制剂,能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗体结合或酶学活性,因此适宜于进行免疫共沉淀。另外,有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点,这种情况应该使用非变性裂解。
非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris(pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
关于裂解液的选择,一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异,选择合适的裂解液;另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
对于培养细胞样品:
1. 融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P1001),该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
北京现货线粒体提取试剂盒库存关键词:线粒体提取试剂盒,XH058,百奥莱博
ARB10715 人多聚血清蛋白(PHSA)Elisa分析 Human poly serium antigen,phsa ELISA KIT
丁二酸钠 Boc-Arg(NO2)-OH 150-90-3
ARB12821 小鼠儿茶酚胺(CA)酶联免疫定量检测 Mouse catecholamine,ca ELISA KIT
ARB13495 鸡脂多糖/内毒素(LPS)免费代测 Chicken lipopolysaccharides,lps ELISA KIT
F030408 胶体金标记山羊抗小鼠IgG1抗体 Goat Anti-Mouse IgG1*GOLD
BTN60102 氯霉素干粉 Chloramphenicol Powder
7791-18-6 氯化镁六水
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 TAPS 9067-77-0
ARB13775 豚鼠3-羟-3-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA)ELISA检测服务
ARB12652 大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)elisa检测说明书 Rat eosinophil chemotactic factor,ecf ELISA KIT
BTN90309 红细胞裂解液B型(流式细胞分析用) Red Cell Lysis Solution,Type B
ARB14140 大鼠泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)含量分析
BTN130428 甲基化PCR 2.0试剂盒 Methylation-Specific PCR V2.0 Kit
草酸铵 L-GLDH 6009-70-7
ARB10153 人S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)含量检测
我公司生产供应销售的蛋白质研究产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。