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北京百奥莱博科技有限公司
25次/50次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:YBP105
规格:25次/50次
产品介绍:
RNAmisi micR NA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒是专用于micR NA的反转录试剂盒,由于micRNA没有Poly(A) 结构,不能直接用Oligd(T) 进行反转录,需要先在micRNA的3"末端加上Poly(A) 结构后才能进行反转录。该试剂盒包括了在micRNA 3"末端加Poly(A) 和反转录的所有试剂,具有高效的Poly(A) 化和反转录效率。该试剂盒须与RNAmisi micRNA SYBRGreen qPCR SuperMix试剂盒配套使用。
注意事项:
• 反应中可以使用micRNA或Total RNA,如果使用的是Total RNA必须含有小分子RNA。
• 标准20 μl反应体系需要Total RNA的量为10pg~1μg,如果使用>1μg的总RNA,则反应体系需要相应的增大;小分子R NA需要的量根据micRNA的丰度决定,一般使用RNAmisi微RNA快速提取试剂盒提取的micRNA建议加入2~5μl。
• 为了减少RNA降解的机会,配置反应体系时建议在冰上操作。
• 5× RNAmisi micRNA RT Reaction Buffer中包括通用的micRNA反转录引物和dNTP。
• 对于GC含量丰富或者二级结构复杂的mRNA模板可以提高反应温度到45°C来帮助逆转录反应延长。
产品储存:
-20°C 保存。尽量避免多次冻融或存于温度变化较大的地方, 减少对产品稳定性的影响。
关于RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
RN0701 EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒
ARB10846 人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA(tTG-IgA)含量测试 Human anti-tissue transglutaminase iga,ttg-iga ELISA KIT
9002-07-7 Trypsin 1:250 胰蛋白酶1:250
CYB162034 羊抗人纤维蛋白原(抗血清) 0.5ml
ARB10130 人N端外显肽(Ext-N)酶标法分析 Human n-terminal extein,ext-n ELISA KIT
橙黄Ⅱ Methyl blue 633-96-5
ARB13703 兔肾素(RenIn)Elisa定量检测 Rabbit renin ELISA KIT
ARB14149 大鼠糖基化终末产物(AGE)血清中含量检测
1,4-双(5-苯基-2-恶唑)苯 Carboxypeptidase A 1806-34-4
PY02-053 HE琼脂(HE) 250克
1064-48-8 NAPHTHOL BLUE BLACK ELECTROPHORESIS 氨基黑10B
ARB10707 人多功能蛋白聚糖(VS)Elisa分析 Human versican/pg-m/pg-350,vs ELISA KIT
羟yi基-β-环糊精 Aldosterone 128446-32-2
CYB162040 羊抗鸡IgG(抗血清) 0.5ml
肌氨酸钠 Fast red RC salt 4316-73-8
BTN80401 柱式OLIGO回收试剂盒 Column OLIGOBACK
ARB13553 兔子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)elisa检测说明书 Rabbit macrophage inflammatory protein-1α,mip-1α ELISA KIT
BTN90604 PCR法DNA探针标记试剂盒 PCR DNA Labeling Kit
直链淀粉 Sodium DL-lactate 9005-82-7
ARB10998 人泛素蛋白D(UBD)尿液中含量检测 Human ubiquitin d,ubd ELISA KIT
ARB11880 人激肽释放酶11(KLK 11)血清中含量检测 Human kallikrein 11,klk 11 ELISA KIT
BL1249 MarkerIDNA Ladder
RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒关键词:RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒,YBP105,百奥莱博
·dCTP 100mM Solution
编号:YBP098
规格:0.25ml
产品介绍:
纯度98%以上。经检验确认,用于PCR反应时扩增良好,不含有RNase。可作为DNA聚合酶的底物使用。
产品储存:
-20°C(长期保存请置于-70°C)。
·胚乳组织及丝状真菌超纯RNA快速提取试剂盒
编号:YBP005
规格:20次/50次
适用范围:
适用于从胚乳组织和丝状真菌材料中提取无基因组DNA污染的高纯度的总RNA。
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:
独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从玻璃纤维膜上洗脱。
产品特点:
1.离心吸附柱内玻璃纤维膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.独有的植物RNA助提剂可以有效结合多糖多酚,提高清除效果。
5.基因组DNA清除柱可以有效的消除基因组DNA的污染。
6.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到12,000 rpm的传统台式离心机。
2.需要自备乙醇, β-巯基乙醇,一次性注射器(可选),研钵。
3.裂解液RLCplus2 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯 度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间,但这并不表示RNA 不纯。
浓 度:取一定量的 RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!
操作前在裂解液RLCplus2中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLCplus2中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLCplus2 4℃可放置一个月。
1.直接研磨法(推荐):
a. 新鲜胚乳组织或丝状真菌称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg放入研钵), 加入10体积(1ml)RLCplus2(请确定已加入β-巯基乙醇)和1体积(100μl) PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLCplus2立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
b. 将裂解物转入离心管,剧烈摇晃振荡15秒,12,000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid,将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中(清除柱放入收集管中),12,000rpm离心30~60秒,收集滤液。接下步骤3
2.液氮研磨法:
a.取500μl裂解液RLCplus2(已经加入β-巯基乙醇),转入1.5ml离心管中,加入50μl PLANTaid混匀备用。
b.液氮中研磨适量胚乳组织或丝状真菌成细粉后,取50mg细粉转入上述装有RLCplus2和PLANTaid的离心管, 立即用手剧烈振荡20秒,充分裂解。
c.用带钝针头的一次性 1 ml(配0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
d.将裂解物12,000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid, 将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中(清除柱放入收集管中),12,000rpm离心30~60秒,收集滤液。接下步骤3
3.较精确估计所收集的滤液体积,加入0.5体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心60秒,弃掉废液。
4.向吸附柱RA中加500μl 去蛋白液RW1,室温放置30秒,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
5.向吸附柱RA中加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
6.将吸附柱RA放回空收集管中,12,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在 70-90℃水浴中加热效果更好), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。
8.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤7, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
附录:DNase I柱上消化
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本公司的EASYspin系列RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜,避免了大部分的DNA残留,此外,本试剂盒中配备的基因组DNA清除柱也可以有效的消除基因组DNA的污染。然而,由于材料的差异,某些材料也许基因组残留会非常明显,或者加入的裂解液和材料的起始量没有很好比例时,即使通过基因组DNA清除柱也会有没有完全消除掉基因组DNA的污染的情况,尽管在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,此时可用RNase free DNaseI直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA,然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。
DNase I 工作液的配制:
取10x DNase I buffer 8μl ,加入 DNAse I 3μl(15U),RNAse 抑制剂10U(可加可不加,建议加),无核酸酶水补足至80μl,轻柔混匀。
DNase I柱上消化操作步骤:
1.前面按照正常步骤操作,在操作步骤4加入去蛋白液RW1步骤前按照以下步骤操作。
2.向吸附柱RA 中加入350 μl 去蛋白液RW1,12,000 rpm 离心30-60 秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
3.向吸附柱RA 中央加入80μl 的DNase I 工作液,室温放置15 分钟。
4.向吸附柱RA 中加入350 μl 去蛋白液RW1, 12,000 rpm 离心30-60 秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
5.接操作步骤5中加入漂洗液RW步骤等后续步骤。
RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒关键词:RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒,YBP105,百奥莱博
PY04-026 40%尿素水 5ml/瓶×10 加入95ml尿素酶琼脂基础,用于尿素酶生化试验
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BL0951 胶体金标记羊抗人IgA(u链特异)抗体
ARB12749 小鼠CD30分子(CD30)检测服务 Mouse cluster of differentiation 30,cd30 ELISA KIT
BL0231 Dextran T-500 葡聚糖 T-500
2,6-二甲氧基-β-环糊精 Galactose oxidase 51166-71-3
ARB11137 人肿瘤血管生长因子(TAF)代做ELISA实验 Human tumor angiogenesis factors,taf ELISA KIT
F030217 HRP标记兔抗狗IgG抗体 Rabbit Anti-Dog IgG*HRP
4-甲氧基偶氮苯 Cresol Red sodium salt 2396-60-3
硫酸银 2-Mercaptopyridine N-oxide sodium salt 10294-26-5
ARB11657 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)酶联免疫定量检测 Human proteinase-antineutrophil cytoplasmic antibody,pr3-anca ELISA KIT
PY02-165 碱性胆盐琼脂(AB) 250克
ARB10437 人甲状腺抗体(TAb)elisa检测说明书 Human thyroid antibody,tab ELISA KIT
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销售生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购RNAmisi micRNA 逆转录第一链cDNA合成试剂盒。
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