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文献和实验相关专题 Northern Blotting技术专题 A.质粒 DNA的小量提取 试剂及其配制 含AP的LB液体培养基 TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0) 1mmol/L EDTA (pH 8.0) 溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0) 10mmol/L EDTA 50mmol/L 葡萄
PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高 模板核酸的产量. 传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组份，溶解细胞膜， 使蛋白质变性，再用蛋白酶K来消化
PCR 反应体系的模板 几乎所有形式的DNA和RNA都是PCR反应的合适底物，包括基因组DNA、质粒DNA、噬菌体DNA、预先扩增的DNA、cDNA和mRNA。大多数PCR操作中,对DNA模板的要求都不高,纯度要求亦不严,用量很低。理论上,单拷贝基因都可以扩增,但从高度复杂的DNA样品中进行扩增,可能比从质粒、噬菌体中进行扩增要困难些，如在PCR反应前用机械剪切或稀有限制酶消化基因组DNA可提高产量。 核酸标本来源广泛,可以从纯培养的细胞或微生物中
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