Western blot技术的一般步骤是将经过SDS-PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。由于Western blot检测技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点,因此可检测到1-5 ng (最低可到10-100 pg)中等大小的靶蛋白。同时,Western blot技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。