63550-99-2标准品甜菊苷C、瑞鲍迪苷C、莱苞迪苷C

荧光定量 PCR 反应没有平台期—看完这篇文章，不必再纠结

许多用户在做荧光定量 PCR 实验中，总会向我们来电咨询：荧光定量 PCR 需要跑到平台期才准确？我的扩增曲线没有平台期，是不是使用的试剂不好？是不是扩增失败了？也有些用户会通过增加 PCR 循环数来实现平台期，这种做法是否可取呢？下面我们将以一组对比实验为例来看看平台期到底是否会影响定量结果，又有哪些因素会影响到扩增曲线的平台期呢？ 来看一个典型的例子（图 1），这是一组 6 个梯度稀释的标准品，扩增曲线指数期之后是漫长的线性扩增期，直到循环结束也没有出现明显的平台期。这样的结果能否得到理想

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

稀释 Slope ～ -3.3 R2 > 0.99 精密度 至少 3 个重复 标准差 除了这些因素，还必须评估和验证合适的实验对照（如无模板对照，无 反转录酶对照等）以及模板质量。 3. Real-time qPCR 定量方法 可以分绝对定量和相对定量。绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒 DNA，体外转录的 RNA，或者是体外合成的 ssDNA。相对定量可以分比较 Ct 法

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

1）为了在SG反应后作溶解曲线，引入与溶解曲线起始温度点相同的保温步骤（大约60秒），这样可以确保溶解温度起始于一个确定的温度。2）溶解曲线分析可以重复。可以在相当一段时间内重新作溶解曲线，甚至到第二天也可以。3）关于可以用SG检测的引物对的列表4） 进行SG分析的典型程序是什么？变性：检查反应所用的酶（2min，5min，10min或15min）循环：95度/20秒，退火温度/20秒，72度/20秒保温：72度/60秒溶解：72-99度，on Melt A5）在哪个通道SG可以被检测？双通道