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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
78
- 供应商:
深圳子科生物
- 检测范围:
详情咨询在线客服
- 检测方法:
酶联免疫分析ELISA方法
- 应用:
仅供科研研究实验
- 规格:
96孔
试剂盒未提供的材料
1、蒸馏水或无离子水
2、甲醇
3、量筒100ml
4、烧杯(样品提取和收集)
5、滤纸Whatman GF/ A or equivalent
6、移液器 50 μL
7、50 和100 μL8道移液器
8、吸水纸
9、450nm酶标仪
10、计时器
11、混合器
样品制备:
1、研磨样品,用20目筛过滤,不马上使用的样品要放在冰箱储存。
2、在烧杯中称量50g样品和5g NaCl。
3、并加入100ml 80%的甲醇水溶液,密封放置。
4、剧烈震荡1分钟。
5、用Whatman GF/A滤纸过滤至少10ml样品处理液,然后转移到一个新的干净的容器中。
6、用20ml的水稀释5ml的提取液。
操作步骤:
注意:标准和样品做平行可以增加精密度和准确度
1.使用前将试剂盒和样品处理液提前从冰箱中拿出来使其达到室温。
2.从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条,放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3.每个测试孔都加入50 μL酶结合物
4.在对应的微孔中加入50μL的标准和样品,确保吸头要干净。
5.每个测试孔都加入50 μL抗体溶液
6.孵育10分钟
7.孵育完成后,将微孔中的溶液倒入水槽中,用自来水加满微孔然后倒掉,重复四次,总共五次洗板。
8.最后一次洗板后要拍板,去掉残留的洗液。
9.每个测试孔加入100μL底物。
10.孵育10分钟
11.每个测试孔加入100μL终止液。
12.450nm 下读取每个孔的吸光度值(OD)。
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文献和实验测定时处于弱阳性水平,称为临界值。乙肝标志物临界值的制定,应按临床要求,为临床提供统一的判断弱阳性的标准。临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品,它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平,确保弱阳性反应的标本不漏检。5.2.3 质控血清的制备每个实验室可以根据自己的条件,选用临床中心提供的质控血清,或按以下方法自己制备本室使用的质控血清(以乙肝质控血清为例)。1) 收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。2) 56℃加热10小时来活。3) 离心或过滤除去沉淀
工作质量。 现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清,HBsAg浓度为5ng/ml.在该实验室中选择素质最好、操作最熟练的技术员进行认真地专门测定,选用最佳的试剂盒,检测之前,将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试,使用新的加样吸头等,即在最佳、最理想的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定,得出2个吸光值(A值),求出X.连续作20次,求出20个X,即X1……X20.从这20个数据中,求出OCV的X和SD. (二)常规
差(SD)表示该实验室的最佳工作质量。 现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清,HBsAg浓度为5ng/ml。在该实验室中选择素质最好、操作最熟练的技术员进行认真地专门测定,选用最佳的试剂盒,检测之前,将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试,使用新的加样吸头等,即在最佳、最理想的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定,得出2个吸光值(A值),求出X。连续作20次,求出20个X,即X1……X20。从这20个数据中
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