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- 2026年01月17日
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文献和实验本底值增高。OPD 底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD 产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB 受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应边观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB 经 HRP 作用后，约 40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至 2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间（12-24
体，洗板 5 次，方法同步骤 3。 底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃ 避光孵育 15 分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。 终止：每孔加终止液 50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 读值：立即用酶标仪在 450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。 实验完毕后，将未用完的试剂按规定
气泡。加样时间宜控制在10分钟内。 洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。 HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。 洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤2。 底物：每孔加底物溶液(TMB)90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短
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