鸡褪黑素(MT)酶联免疫试剂盒ELISA

鸡褪黑素(MT)酶联免疫试剂盒ELISA

鸡蛋蛋清中C型溶菌酶检测
实验目的：
检测蛋清中C型溶菌酶的含量。
实验样本：
鸡蛋蛋清，客户提供。
样本数量：
86个。
样本处理步骤：
1.样本清点：对客户送样进行统计编号，对所有样本进行统计登记。
2.样本稀释。按照客户指南，蛋清仅经过取样，搅拌，未进行稀释。根据之前的经验，蛋清属于高蛋白样本，需要提前稀释样本。随机取3个样本，用0.8%生理盐水进行100,200,500，1000倍稀释（考虑到上样时还需进行5倍稀释，故此梯度不用拉太大），进行简单的蛋白定量跟上样检测。结合预实验的结果跟参考文献，选定200倍稀释。
检测步骤：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.加入50μL终止液使反应停止，450nm处检测光吸收值。
所用仪器：
帝肯Infinite F50酶标仪

鸡褪黑素(MT)酶联免疫试剂盒ELISA

公司：上海笃玛生物科技有限公司
产品名称：A0401|猪胰岛素(p-Ins)纯抗原及半抗原
类别:纯抗原及半抗原（用于制备标记抗原和抗体）
性状:冻干粉
规格:0.1mg/1.0mg
货号：DMZ018猪胰岛素(p-Ins)纯抗原及半抗原 现货直销，质量有保障，欢迎来电订购！

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-6抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的
人IL-6会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的抗人IL-6抗体。抗人
IL-6抗体与结合在包被抗体上的人IL-6结合，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在
辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-6
浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-6的浓度。


样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组
织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，
取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
具体处理方法可参考：http://www.elabscience.cn/index.php/resources/view/aid/17671.jsp
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先
做预实验，以确定稀释倍数）。

鸡褪黑素(MT)酶联免疫试剂盒ELISA

试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸

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鉴于产品的特殊性，请严格按照说明书操作！！！

本产品仅供科研实验，不做其它用途！！！


产品包装：盒装

性状：瓶装液体

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

保存期限：6个月

运输条件：2-8℃低温运输，用干冰或者生物冰袋低温运输。
鸡褪黑素(MT)酶联免疫试剂盒ELISA

性能:
1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2．灵敏度：最低检测浓度小于10 pg/ml。
3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

笃玛生物关于试剂盒的优势：

1.高效，灵敏，特异的抗体
2.稳定的重复性和可靠性
3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高和固相载体
4.适用血清，血浆，组织匀浆液，细胞培养上清液，尿液等多种标本类型

样本要求
1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。


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