红细胞裂解液-100ml

小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项

小鼠腹水及单细胞悬液制备流程 配制 6% 淀粉肉汤。 6% 淀粉肉汤配制方法：牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1.0g、氯化钠 0.5g、蒸馏水 100mL，上述材料混合加热后加入可溶性淀粉 6.0g；溶解后，121℃ 高压灭菌 15~20 min，EP 管分装封口，将肉汤放置于 4℃ 保存。 小鼠腹腔注射 1mL 6% 淀粉肉汤（注意避开肠管和内脏），刺激 60~72h。 颈椎脱臼法处死小鼠，用 75% 酒精浸泡小鼠 5min。 将小鼠置于解剖板中，固定四肢，剪开皮肤，充分暴露腹膜。 用眼

小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠外周血单细胞悬液制备 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。 加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。 300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。 PBS 洗涤一遍。 加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项： 采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

。 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞，室温裂解2~3 min后，立马加入10 mL PBS，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞，将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×107/mL。 b) 吹打法 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%乙醇浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面