
即用型透析袋MD18(15000) 15KD(一万五千道尔顿
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- 2025年07月01日
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麦瑞博
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文献和实验红色沉积物溶解后,即为初步提纯的金标-A蛋白试剂。(二)凝胶过滤法凝胶过滤法必须以BSA为稳定剂。将前述胶体金-蛋白质复合物装入透析袋内,置硅胶中浓缩至原体积1/10左右,用蒸馏水冲洗软化透析袋后,取出浓缩液,以15000r/min离心15min(或用上述离心法纯化后的胶体金,再进一步用此方法纯化)。吸取上清液加到丙烯葡聚糖S-400(SephacrylS-400,Pharmacia公司产品,Sweden)色谱柱上分离纯化。柱床高20cm,直径0.8cm,加样体积为柱床体积的1/10.用0.02
μg/ml)扩增,37℃温箱中培养过夜。 (4)收集菌液于离心管中,冰浴10min。3000rpm,离心10min,去上清。 (5)加溶液Ⅰ5ml悬浮菌体,将悬液倒入高速离心管中,摇匀,冰浴5min。 (6)加溶液Ⅱ10ml轻轻混匀,室温下5min。 (7)加溶液Ⅲ7.5ml轻轻混匀,冰浴30min。15000rpm,4℃离心20min。 (8)取上清液于高速离心管中,加2倍体积的无水乙醇,混匀,入-20℃3~5h。
% 冰上预冷的丙酮中,振荡后在暗处于冰上静置 10 min。4°C 条件下 15000 g 离心 5 min。收集绿色上清液部分,测定其在 663.2 nm 及 646.8 nm 处的吸光值。叶绿素 a 浓度 + 叶绿素 b 浓度( μg/ml) = ( 1+v)/v X(7.15X A663.2 + 18.71 X A646.8 ) 。 ( 6 ) 也可以直接在 300000 g 条件下离心 25 min,然后收集类囊体和包膜结构。但是在这种离心力下得到的沉淀难以重新悬浮,同时,高离心
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