猴白介素10(IL-10)ELISA试剂盒说明书

猴白介素10(IL-10)ELISA试剂盒说明书

 

超氧化物歧化酶对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。此酶能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤，本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活力。可测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、精液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞、及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的SOD活力，并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。既可测总SOD又可测锰-SOD及铜锌-SOD。

产品优点如下：

1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。

2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20l～50l即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需5mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD、0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。

3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。

4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。

5、再现性好：变异系数CV=1.7%。

6、回收试验： X =103.3%。

7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳。

 

 

何谓热灭活?

一般是以56C，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

 

?我需要灭活血清吗?

–实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 "小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37C环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

–因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保您血清的质量!

.血清融化的正确步骤

我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8C冰箱24小时左右使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

切勿将刚刚从－20℃冰箱里拿出来的血清直接放在水浴中，无论室温的水或者37℃的水，因为在水浴中血清迅速熔化，很大的温差（－20到37，温差为57℃）极其容易造成血清产生沉淀

直接放65℃水浴中更是极其残忍的做法，是对血清的亵玩，对科学规则的粗暴践踏！

. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现该如何处理

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

 

猴白介素10(IL-10)ELISA试剂盒说明书

 

笃玛生物品牌优势：

1.高效，灵敏，特异的抗体

2.稳定的重复性和可靠性

3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高和固相载体

4.适用血清，血浆，组织匀浆液，细胞培养上清液，尿液等多种标本类型

 

ELISA的样本实验准备

在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6. 组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 笃玛代测服务：

技术服务内容： 1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。

寄标本时需注明以下情况：1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；4、lianxi方式；5、实验后标本是否寄回。

猴白介素10(IL-10)ELISA试剂盒说明书

 

代测，有什么具体要求？

样本要处理过的，寄来的样本附检验要求 （一定要附检验要求 ）

样本寄来要记得保存好，一定要放置冷冻冰袋

 

什么样的检验要求？要出示什么吗？

怎样算是处理过？还是就只是离心保存？

答：离心保存，检验要求，就是标本标号，和特殊要求

问：测好多指标 血清不分开可以么？

答：要分开，分好后，分别标上序列号，便于实验好区分。

 

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

注：

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N  。测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

计算

以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

 

新生牛血清，类标准胎牛血清是笃玛生物的优质产品，笃玛生物成立的初衷就定位于以人为本，以品质取胜的理念，为我们国家生命科学研究做一些力所能及的工作。公司主要经营的产品有测试盒、标准品、有机试剂以及常用的进口试剂品牌的代理，质量保证。

 

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新生牛血清，类标准胎牛血清

 

血清解冻最好采用逐步解冻法（-20℃→2—8℃→25℃或37℃），解冻过程中必须随时轻摇，使血清受热温度均匀。

 

血清凝絮物，血清解冻后会出现少量片状或絮状物析出，这主要是由于血清内不稳定蛋白变性、纤维蛋白析出形成沉淀物，实验证明沉淀物不会影响血清本身质量。

 

热灭活本产品除注明外均未灭活。如果必须灭活，请严格按照56℃30分钟（水浴）处理已解冻血清。

 

常温状态下短期融化并不会影响血清质量。

 

产品有效期，检定合格之日起有效期5年。

 

 

新生牛血清，类标准胎牛血清

 

笃玛品质保证

售前：为客户提供全面技术咨询服务并提供说明书，任何咨询都会细心答复，无论购买与否。

售后：所有血清如有质量问题，免费包换，每个技术性的问题都会为你耐心解决。

 

 

如 需 不 同 规 格、包 装 和 特 殊 要 求 的 血 清 我 们 可 以 另 行 加 工

 

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收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。

 

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。

( 二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。

3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。一传二。

注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造

成生长不好。

 

 

 

订货说明：

1.当天下午3点30分之前下单，可当天发货。

2.进口期货货期一般3-4周，部分产品现货请咨询业务人员。

3.客户对定制产品有特殊要求，要提前备注。

4.送货方式：快递上门，如特殊产品业务员亲自派送。

5.客户收到产品，如发现产品有破损及时与我司联系，我司会在第一时间处理。

6.笃玛品质保证，价格优势。生物种类试剂齐全，欢迎广大客户咨询订购。

 

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