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- Biomed
- 中国
- BC301-01
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
LBA4404
- 库存：
大量
- 供应商：
宏喆生物
采用化学试剂制备的LBA4404农杆菌感受态细胞，适用于玉米和烟草等植物的转基因操作。具有链霉素和利福平抗性，经植物双元pCAMBIA2300M质粒检测，转化效率可达103CFU/ug，-80°C保存几个月转化效率不会发生改变。
转化前准备：
1.冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3.将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法（采用冻融方法）：
1.取-80℃保存的LBA4404农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2.无菌条件下，向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1ug需要转化的质粒DNA细胞中，轻轻混匀，冰水浴中静置10分钟。
3.将离心管至于液氮中速冻5分钟。（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）
4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持 5分钟，不要晃动水面。
5.将离心管放回冰水浴中，再保持 5分钟。
6.无菌条件下加入800ul无抗生素的2×YT或LB液体培养基。于28℃振荡培养2-3小时，目的是使菌体复苏并表达抗生素抗性。
7.5000rpm离心 1分钟收菌，留100ul左右上清，轻轻吹打重悬菌体，加到相应抗生素的LB固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28℃培养48-72小时。
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文献和实验相关专题 DNA连接与转化 农杆菌感受态细胞的制备 1.挑取少许农杆菌LBA4404，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。 2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养，直至OD800 为0.5左右。 3.将培养物置冰浴中30min，4℃、5000r/min、离心5min，弃去上清液。 4.用10ml冷
一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g/L L-Glutamine,0.2 g/L NaCL,0.2 g/L MgSO4 ,0.3 g/L Yeast extract,PH7.0）液体培养基中，220rpm，28℃振荡培养18 hr
Agrobacterium growth and transformation (农杆菌培养及转化)
. The most commonly used strains LBA4404 and GV3101 carry chromosomal resistance to rifampicin, each has a Ti-plasmid (carrying vir [virulence] genes) which encodes another antibiotic resistance. This is summarised in the table below. GV3101 are the same as ‘C58C1RifR
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