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上海然哲仪器设备有限公司
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心肌细胞分离技术介绍:在许多心血管或电生理实验中,或者进行长期培养的情况下,从体外灌流的心脏上分离不同的心肌细胞是一个最重要的基础处理步骤。系统可以设置为恒压或恒流模式。恒流模式下,首先用心肌分离溶液(Kreb’s或者Tyrode’s)去除血细胞,平衡制备样本,然后使用包含EGTA的溶液去除残留的钙离子。然后使用一种包含胶原酶或者其他消化酶的溶液重新循环灌流制备样品直到心脏变得松弛,说明心肌细胞起到支撑作用的内部网状结构已经溶解掉了。最后将部分溶解的心肌组织切成小片,放置在恒温水浴摇床进行溶解处理指导每个单独的心肌细胞都被释放出来。根据不同操作规程,可能需要对溶液进行几次调整,以选择可以有最大产量并且更多多样性。如果想增加产量,可以逐步改变孵化介质中的钙离子浓度,以在正式使用前,使心肌恢复到一个正常的离子环境。
上海然哲设备有限公司专注于为科研/教学工作者提供专业的仪器设备与周边服务。我们希望让研究者的工作变得更高效,同时也关注人类健康事业,致力于为科研与临床应用或转化起到促进作用。
然哲仪器的产品与服务主要面向基础医学、药物研究以及转化医学等相关领域的研究,主要产品系列包括:
心脑血管研究:
1、小动物超声光声成像系统;
2、矩阵式心脏电生理标测系统;
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神经科学与行为学研究:
1、小动物脑电肌电研究系统、在体多通道记录系统;
2、视频行为分析系统,步态分析系统、各类行为学箱体等;
肿瘤、免疫与骨骼研究:
1、X射线生物辐照仪、高分辨率X射线成像系统;
2、安捷伦智能流式细胞仪、多功能实时无标记细胞分析系统(RTCA);
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文献和实验操作演示
器械:饭盒、烧杯、弯头解剖剪(2)、小镊子(2)、平皿(4)、毛玻片、滤网、离心管(15ml)、移液管、培养瓶、废液缸、PE手套、橡胶手套、冰盒溶液:PBS、DMEM(含血清)、DMEM(free)、胰酶动物:小鼠准备:用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好,开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束,提前半小时将培养液、胰酶37℃温浴。培养过程:1、两个圆皿中加入5ml的PBS培养液,将小鼠浸入70%酒精2、取出的心放在一个装有PBS的平皿中,剔除心脏周边的血凝及纤维组织。3、PBS再冲洗后,转移
大鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养,用无血清培养基,呈杆状,横纹清楚,在培养基里细胞不搏动。 大鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离,浓度为1mg/ml(用无钙台氏液配制),同时酶液里加入牛磺酸,BSA。一般采用Langendorff灌流的方法,大鼠开胸后,迅速取出心脏,放入冰的台氏液中,找到主动脉后,挂上Langendorff装置,衡流泵灌入无钙台氏液(37度),开始心脏会搏动几下,这样把心脏中的淤血挤出(此处也有人用有钙台氏液灌流,好让心脏充分搏动










