人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)酶联免疫试剂盒

人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)酶联免疫试剂盒
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。
然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓
度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空
白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标
准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。


人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)酶联免疫试剂盒
计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批见应分别小于9%和15%

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月
人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)酶联免疫试剂盒
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分
别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触
及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次
实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟
内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。
3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸
上轻拍将孔内液体拍干。
4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。
5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情


6th Edition, revised in June, 2014
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况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液
的加入顺序相同。
8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪
器，设置好检测程序。
9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存

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