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- 2025年07月15日
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文献和实验Protocol for First-strand cDNA Synth
Prepare in a sterile tube: template RNA: total RNA 0.1-5µg or poly(A)+ mRNA 10ng-0.5µg, or specific RNA 0.01pg-0.5µg primer: oligo(dT)18 0.5µg
2-D Polyacrylamide Gel Electrophoresis
Thiourea 2 g Chaps 0.5 g Mega 10 0.5 g OBG 250 µl Triton X-100 0.25 g Tris 0.4 g DTT 500 µl Pharmalytes or IPG buffer pH 3-10 (Amersham) 500 µl - mercaptoethanol 4.Add 10 µl tributylphosphine 2 mM,under the hood (2 mM final conc.) 5.Add
------------------------------------------------------------ = dpm/µg (ng DNA synth. + ng input DNA) x 0.001µg/ng Note The factors 20 and 50 are derived while using 5µl of 1:100 dilution for DE-81 filter-binding assay
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