琼脂糖凝胶亲和层析介质 rProtein G

rProtein G Beads
规格：2ml/10ml 保存：2-8℃ 产品介绍： Protein G 是一种分离自 G Streptococci 的细胞壁蛋白，它可通过其 Fc 片段结合哺乳动物 IgG。 重组 protein G 含有高亲和结合位点，减少了非特异性吸附。Protein G 和 Protein A 有不同的 IgG 结 合特性，相比 Protein A，Protein G 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力，它还可以结合不能 与 Protein A 很好结合的大鼠 IgG、人 IgG3 和小鼠 IgG1，具体结合能力见表。
纯化流程：
    1、Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤。 结合/ 洗杂 Buffer: 0.15MNaCl，20mMNa2HPO4，pH7.0 洗脱 Buffer: 0.1M 甘氨酸，pH3.0 中和液： 1MTris-HCl，pH8.5
   2、样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹 水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止 堵塞柱子。
   3、样品纯化
1)将 rProtein G Beads 装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡，使填料处于 与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的 rProtein G Beads 中（保证目的蛋白与 rProtein G Beads 充分接触，提高目的 蛋白的回收率），收集流出液。
3)用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4)使用 5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5)依次使用 3 倍柱体积的结合 Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用 5 倍柱体积的 20% 的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4 度保存，防止填料被细菌污染。 4、SDS-PAGE 检测 将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。