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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant CCAAT/Enhancer Binding Protein Gamma (CEBPg)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg/50ug/100ug/1mg
| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
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| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
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1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验沉默子 (silencer) 是参与基因表达负调控的一种元件，是在研究 T 淋巴细胞的 T 抗原受体 (TCR) 基因表达调控时发现的。 TCR 有α / β、γ / δ两种，编码α链和δ链是同一基因座的两个等位基因，α链恒定区 Ca 基因 3 ’端下游的。增强子在各种 T 细胞中都有可能表达。因此，在 T 细胞分化时，需要通过各种正负调控机制进行精确的选择，方能正确地表达。已知有 3 个负调控元件，一个紧接在 Ca 基因的 3 ’下游，另一个则在 Co 增强子的上游。对α基因
三句话读懂一篇 CNS，首次揭示从鱼进化到人的演变机制，运动能帮助人体对抗慢性炎症...
human skeletal muscle，研究利用实验室培养的工程化肌肉证明，人体肌肉具备一种天生的特性，即肌肉运动时抵御慢性炎症带来的破坏性，防止肌肉萎缩和收缩能力不足，维持机体正常的生命活动。且证明干扰素 γ 不依赖于其他细胞类型或组织，主要通过一种特定的信号途径发挥作用。总之运动的肌肉细胞可以直接对抗干扰素 γ 诱导的促炎信号。宅男宅女们空闲时不要再窝着不动啦，多运动活得久！ 图 6：来源 Science Advances 7. NEJM: CRISPR-Cas9 基因编辑技术治疗镰状
网络 三 、细胞因子受体基因 IL-2R基因的转录是T细胞活化过程中的重要表现，它对于T细胞自分泌生长是必需的。目前证实IL-2R由三条肽链组成，即α、β、γ链。TCR介导的T细胞刺激可以导致IL-2R亚单位p55（α链）表达升高。IL-2Rα基因有一个5`增强子区域，它可以同PMA诱导的核因子结合。有关IL-2Rβ、γ链的转录调节还不清楚。编码
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