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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20℃至 -80℃
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Homo sapiens (Human)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Fibronectin (FN)
- 抗体名:
纤连蛋白(FN)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko Koide and Shohei Koide
片段的缺点,包括大尺寸、杂二聚特性(除单免疫球蛋白结构域外)、低构象稳定性和难于大规模生产。至今已发展出来的,这样的人工分子都是基于免疫球蛋白片段或者小单体蛋白。 我们发展了以纤连蛋白 Ⅲ 型结构域(FN3 ) 为分子框架的应用。纤连蛋白是一个大蛋白,在胞外基质生成和细胞间相互作用中起基本的作用。它由多次重复的 3 类(、Ⅱ 和 Ⅲ ) 小结构域组成 [3]。FN3 是广泛存在的结构域,在所有动物蛋白中,其出现率估计为 2% [4]。在人纤连蛋白中,有 15 个 FN3 的重复单位。我们的系统
细胞与细胞间基质的附着是细胞生存与增殖所必需的,这种附着主要由表达于各种组织细胞表面的整合素家族黏附分子来介导。除了p2组外,整合素分子识别的配体大都是细胞外基质的成分.包括纤连蛋白、层黏连蛋白、玻连蛋白和胶原等。细胞与基质的附着主要有以下两种情况:①间质细胞(以成纤维细抱为代表)的周围均与细胞外基质附着;②上皮细胞的周围仅部分与细胞外基质附着,而细胞侧面则与细胞发生附着.在这种情况下细胞黏附分子的分布存在着极性。细胞癌变过程往往伴随着这种极性的丧失。 3.黏附分子参与
白细胞分化抗原和黏附分子的胞膜外区结构 1.免疫球蛋白结构域和免疫球蛋白超家族 在白细胞分化抗原中,具有免疫球蛋白超家族(1gSF)结构域的分子约占1/3。IgSF结构域由90~110个氨基酸残基组成,可分为V样、C1和C2结构域。 2.Ⅲ型纤连蛋白(fibronectintypeⅢ,FN3)结构域 约由100个氨基酸残基组成,p―片层的折叠与IgSF和细胞因子受体结构域相似,但在序列上并无明显同源性。FN3通常有一个
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