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- kl967Bo21
- 2025年07月15日
- WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- Mouse小鼠，Human人，Rat大鼠、、、、、
- Bos taurus; Bovine (Cattle)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 形态：
粉末/液体
- 保存条件：
-20℃至-80℃
- 克隆性：
见说明书
- 标记物：
未标记
- 适应物种：
Bos taurus; Bovine (Cattle)
- 宿主：
Mouse小鼠，Human人，Rat大鼠、、、、、
- 应用范围：
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度：
500ug/ml
- 抗体英文名：
Monoclonal Antibody to Apolipoprotein A4 (APOA4)
- 抗体名：
载脂蛋白A4(APOA4)单克隆抗体
- 规格：
200ug
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单克隆抗体制备的基本过程如下：
（1）用抗原免疫小鼠；
（2）从抗原免疫过的小鼠获取脾细胞；
（3）应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞。这种细胞不仅能够像B淋巴细胞一样合成性质稳定的转移性抗体，而且能够像骨髓瘤细胞一样无限复制，这样就可以产生大量且性质专一的鼠源抗体；
（4）对获得的杂交瘤细胞进行筛选，选出能分泌高效价抗体的杂交瘤；
（5）对已筛选出的单个细胞进行鉴定和克隆。
杂交瘤产生的单克隆抗体在各个领域中应用越来越广，有很大的优点和潜力。能够根据需要进行研发生产，可建立稳定的细胞株持续供给应用，相比于抗血清能够减少大量的动物和费用，而且纯度高，均一性好，可作为一种标准试剂。
在获得能分泌高效价抗体的杂交瘤细胞株后，一般有两种方法来获得单克隆抗体：小鼠腹腔注射杂交瘤细胞和细胞培养。
（1）小鼠腹水：
将杂交瘤细胞接种到小鼠的腹腔，杂交瘤在腹腔内增殖，取得腹水进行纯化即可得到抗体。此法易于操作，重复性高，且花费少，得到的抗体量多，但伤害动物，而且当需要大规模制备抗体时需要大量动物。
（2）细胞培养：
将杂交瘤细胞进行培养，培养后的上清液中即含有抗体。这种方法适合大规模生产抗体。但是这种方法获得的抗体杂质相对较多，因为细胞上清含有培养液，pH指示剂，细胞代谢废物等。而且培养用的血清中的成分不明确，可能会含有能影响抗体纯度的杂蛋白。所以在细胞培养中会逐渐将杂交瘤细胞通过逐步减少血清来驯化到无血清培养。
总之，单克隆抗体的高特异性，重复性使其在生物研究以及医药方向都有良好的应用基础以及前景。
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然而，要想得到一张高质量的免疫组化染色切片也并非易事。由于切片制作和免疫组化染色过程均存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都需要操作者严格控制实验条件，否则可能会影响到最终结果。
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文献和实验1、动物免疫 (1) 抗原制备 制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗是用于抗原不同组分的纯化或分析等，免疫用的抗原只需初步提纯甚至不提纯，但抗原中混杂物很多，特别是如果这些混杂物的免疫原性较强时，则必须对抗原进行纯化。检测用抗原可以是与免疫抗原纯度相同
，然后倍比稀释至一定的稀释度； ② 加入 0.1ml 补体和 1 ％绵羊红血球 0.1ml ，混匀后置 37 ℃ 水浴 1h ； ③ 观察结果，以绵羊红血球完全溶解的杂交瘤细胞培养液的最高稀释倍数为抗体的溶血效价。 2 ．斑点检测法 抗红血球表面的单克隆抗体与浇灌在琼脂板的红血球结合，进而结合补体，而发生溶血斑点，对着光源用肉眼即可判定。 （ 1 ）材料：①绵羊红血球，处理同试管法，最后配成 25 ％红血球悬液； ② 新鲜豚鼠血清（同试管法处理）； ③
和1％绵羊红血球0.1ml，混匀后置37℃水浴1h；③观察结果，以绵羊红血球完全溶解的杂交瘤细胞培养 液的最高稀释倍数为抗体的溶血效价。 2．斑点检测法 抗红血球表面的单克隆抗体与浇灌在琼脂板的红血球结合，进而结合补体，而发生溶血斑点，对着光源用肉眼即可判定。 （1）材料：①绵羊红血球，处理同试管法，最后配成25％红血球悬液；②新鲜豚鼠血清（同试管法处理）；③琼脂糖，配成0.6％PBS液，水浴中溶化；④0.01Mol/L pH7.2PBS液；⑤兔抗羊红血球抗体。
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